[发明专利]检测降钙素原的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析领域，特别是涉及一种检测降钙素原的试剂盒。

背景技术

降钙素原（简称PCT）是无激素活性的降钙素（简称CT）前体物质，来自定位于第11号染色体上（11p15，4）的单拷贝基因，PCT是由116个氨基酸组成、分子量为13KD的糖蛋白。PCT由N末端-降钙素-C末端三部分组成，其不会降解为降钙素，不受体内激素水平影响。PCT的半衰期为25～30小时，是用于检测细菌感染所致炎症反应的较好指标之一。临床资料显示，PCT浓度高于0.1ng/mL时说明存在临床相关的细菌感染，需要采用抗生素进行治疗；当PCT浓度>0.5ng/mL时，要考虑患者可能发展成重症败血症或败血症性休克的危险，因此，PCT可以作为一个全身性细菌感染和脓毒症辅助和鉴别诊断的实验室常规指标。

目前，检测降钙素原的方法主要有放射性免疫分析法（RIA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金免疫层析法（GICA）和化学发光免疫分析法（CLIA）等。RIA有很高的检测灵敏度，但由于标记物具有放射性危害，标记物稳定性差，废弃物难以处理等缺点，已逐渐退出临床检验领域；ELISA法存在灵敏度低、线性范围窄、不易实现全自动化等缺陷；GICA具有操作简单，检测速度快等优点，但也存在灵敏度低、试剂不稳定、重复性较差、难以进行定量等缺点；CLIA法是在酶联免疫分析法基础上发展起来的一种免疫检测技术，具有灵敏度高、检测线性范围宽、操作简便，自动化程度高等优势。目前化学发光免疫分析技术因其有上述诸多优点得到了广泛的应用。但是，现有技术中的化学发光免疫分析试剂盒多为进口的封闭式全自动化学发光检测系统，需要昂贵的全自动化学发光检测仪，从而限制了推广使用，无法广泛地应用于临床诊断和科研工作。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种检测降钙素原的试剂盒，具有简便、快速、灵敏度高、线性范围宽和稳定性好等优点，以克服现有技术的不足。

基于上述目的，本发明提供的检测降钙素原的试剂盒包括：

抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体包被的磁微粒，

异硫氰酸荧光素标记的降钙素原单克隆抗体，

碱性磷酸酶标记的降钙素原单克隆抗体，和

碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物液。

可选地，所述试剂盒还包括用于稀释所述抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体包被的磁微粒、异硫氰酸荧光素标记的降钙素原单克隆抗体和碱性磷酸酶标记的降钙素原单克隆抗体的稀释液，所述稀释液为pH值为7.5～8.5、含质量比为0.3～0.7%的牛血清白蛋白和0.05～0.3%的叠氮化钠防腐剂的0.05～0.2M Tris-HCl缓冲液。

较佳地，所述抗异硫氰酸荧光素多克隆抗体包被的磁微粒悬浮于稀释液配制成0.5～2μg/mL的磁微粒溶液。

较佳地，所述异硫氰酸荧光素标记的降钙素原单克隆抗体溶解在稀释液中配制成0.25～0.5μg/mL异硫氰酸荧光素标记的降钙素原单克隆抗体溶液。

优选地，所述碱性磷酸酶标记的降钙素原单克隆抗体溶解在稀释液中配制成0.25～0.5μg/mL碱性磷酸酶标记的降钙素原单克隆抗体溶液。

可选地，所述化学发光底物液是0.1～0.3M，pH值为8～10的Tris-HCl缓冲液，并含有0.2～0.4mg/mL的二氧杂环乙烷。

较佳地，所述化学发光底物液是0.2M，pH值为9.3的Tris-HCl缓冲液，并含有0.3mg/mL的二氧杂环乙烷。

可选地，所述试剂盒还包括清洗液，所述清洗液为0.1～0.2M，pH值为8～9的Tris-HCl缓冲液中加入质量百分比为0.01～0.04%的吐温20和15～20%的氯化钠。

较佳地，所述清洗液为0.1M，pH值为8的Tris-HCl缓冲液中加入质量百分比为0.02%的吐温20和15%的氯化钠。

可选地，所述试剂盒还包括降钙素原系列校准品，所述校准品浓度范围为0～50ng/mL。

从上面所述可以看出，本发明提供的检测降钙素原的试剂盒采用双抗体夹心法的反应模式，有效地利用了化学发光检测技术结合磁微粒免疫分离技术原理，定量测定人体血清或血浆样品中的PCT含量，确保了检测的灵敏度，且各项指标均达到同类进口试剂盒的分析法水平。而且，对样品的前处理要求低，样品前处理过程简单可靠，可快速、高通量检测大批样品，便于操作和生产。本发明提供的试剂盒结构简便，使用方便，灵敏度高，特异性强，检测范围宽，操作简单，试剂盒成本低，无放射性污染，临床适用性强，更适用于我国临床检测，适合在国内的各级医院推广使用。