[发明专利]一种量子点标记免疫球蛋白的方法

权利要求书

1.一种量子点标记免疫球蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）清洗量子点：用pH=7.2-7.5的磷酸盐缓冲液清洗量子点至保存量子点的原缓冲液除去，并用pH=7.2-7.5的磷酸盐缓冲液保存量子点；所述量子点为羧基水溶性量子点；

（2）活化：向步骤（1）所得的量子点溶液中加入EDC和NHS并混合均匀，在23-25℃下反应50-70min得活化量子点；所述EDC、NHS和量子点的物质的量之比为20000-25000：5000:1；

（3）二次清洗量子点：用pH=8.3-8.5的硼酸盐缓冲液清洗步骤（2）所得活化量子点至EDC、NHS和磷酸盐缓冲液除去，并用pH=8.3-8.5硼酸盐缓冲液保存活化量子点，备用；

（4）清洗免疫球蛋白：用pH=8.3-8.5的硼酸盐缓冲液清洗免疫球蛋白并超滤浓缩除去免疫球蛋白原保存液中的NaN₃，用pH=8.3-8.5硼酸盐缓冲液保存免疫球蛋白，备用；

（5）偶联：将步骤（3）所得活化量子点溶液与步骤（4）所得免疫球蛋白溶液混合均匀，在23-25℃反应5-7h得反应液；活化量子点与免疫球蛋白的摩尔比为1:8-10；

（6）分离：通过排阻层析分离步骤（5）的反应液得蛋白-量子点偶联物溶液和免疫球蛋白回收液；蛋白-量子点偶联物溶液经超滤浓缩后加入封闭液并在4℃下保存；免疫球蛋白回收液经超滤浓缩后回收再利用。

2.根据权利要求1所述一种量子点标记免疫球蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（6）中浓缩后的蛋白-量子点偶联物溶液中还加入NaN₃，使蛋白-量子点偶联物溶液中NaN₃的浓度为0.01-0.05mg/mL。

3.根据权利要求1所述一种量子点标记免疫球蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，EDC、NHS和量子点的摩尔比为25000：5000:1。

4.根据权利要求1所述一种量子点标记免疫球蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（5）中，活化量子点与免疫球蛋白的摩尔比为1:10。

5.根据权利要求4所述一种量子点标记免疫球蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（5）中，活化量子点的浓度为0.8μmol/L。

6.根据权利要求5所述一种量子点标记免疫球蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（5）中，活化量子点溶液与免疫球蛋白溶液混合后在不断摇动中反应。

7.根据权利要求1所述一种量子点标记免疫球蛋白的方法，其特征在于，所述步骤（6）中，排阻层析柱的填料为superdex200或Sephacryl300，流速为1.5ml/min，柱长为40-60cm。

8.根据权利要求1所述一种量子点标记免疫球蛋白的方法，其特征在于，所述封闭液为Gly封闭液，Gly的浓度为1mg/mL，溶剂为50mmol/L、pH=8.3-8.5的硼酸盐缓冲液。

9.根据权利要求1所述一种量子点标记免疫球蛋白的方法，其特征在于，所述羧基水溶性量子点为核壳型量子点或单一化合物形成的量子点。

10.根据权利要求9所述一种量子点标记免疫球蛋白的方法，其特征在于，所述核壳型量子点为ZnS/CdSe或ZnS/CdTe形成的量子点；所述单一化合物为以下化合物中的任一种：第IIIA族元素和第VA族元素形成的化合物、第IIA族元素和第VIA族元素形成的化合物、第IIB族元素和第VIA族元素形成的化合物、第IVA族元素和第IVA族元素组成的化合物、第IVA族元素和第VIA族元素组成的化合物。