[发明专利]一种重组大肠杆菌利用甘油生产乳酸的方法

权利要求书

1.一株可利用甘油生产乳酸的大肠杆菌LDH16172，质粒pLDH，基因工程菌LDH16172和乳酸合成相关酶的基因ldhA。

2.根据权利要求1中，利用甘油发酵生产乳酸的方法，包括培养所需条件和培养基配方。

3.根据权利要求1中利用甘油发酵生产乳酸的大肠杆菌基因工程菌的制备方法，包括：

a.利用设计的引物扩增得到一个相关合成酶的基因片段

b.利用热击法将构建质粒转化入大肠杆菌的方法

c.用氨苄青霉素筛选阳性克隆并用于生产的方法。

4.根据权利要求1中乳酸合成酶的相关基因设计的引物为：引物序列1，2。

5.根据权利要求1中利用基因工程菌生产乳酸的发酵方法及培养基：

LB培养基(1L)：Tryptone(胰蛋白胨)：10g，Yeast Extract(酵母提取物)：5g，NaCl(氯化钠)：10g。若配制固体培养基，则再加入15g Agar(琼脂)。

M9培养基(1L)：Na₂HPO₄·7H₂O(七水合磷酸氢二钠)：12.8g，KH₂PO₄(磷酸二氢钾)：3g，NaCl(氯化钠)：0.5g，NH₄Cl(氯化铵)：1g，Glycerol(甘油)：20g。Yeast Extract(酵母提取物)：5g，1M MgSO₄·7H₂O(七水合硫酸镁)1ML，0.1M CaCl(氯化钙)：1ML。

将所得基因工程菌在3ML含有氨苄青霉素的LB培养基中37℃，250rpm培养12小时，转入M9培养基，M9培养基在使用前加入氨苄青霉素，37℃培养3小时，加入4μL浓度为0.5mM的IPTG诱导，并转入30℃，250rpm培养24-48小时。

6.根据权利要求5中，利用基因工程菌大量发酵生产乳酸的扩大培养方法，包括分批补料，流加等发酵方法。