[发明专利]半衰期延长的人因子IX变体

权利要求书

1.分离的因子IX(FIX)蛋白变体，其与野生型因子IX相比包含一个或多于一个附加的糖基化位点。

2.根据权利要求1所述的FIX变体，其中所述一个或多于一个附加的糖基化位点中至少有一个位于激活肽中。

3.根据权利要求1所述的FIX变体，其包含插入至SEQ ID NO：33所示的人FIX氨基酸序列的N157和N167位置间的肽片段。

4.根据权利要求3所述的FIX变体，其中所述肽片段包含3-100个氨基酸残基。

5.根据权利要求4所述的FIX变体，其中所述肽片段包含小鼠因子IX激活肽的至少一部分。

6.根据权利要求5所述的FIX变体，其中修饰了所述小鼠激活肽以增加糖基化位点数目。

7.根据权利要求1所述的FIX变体，其中所述一个或多于一个附加的糖基化位点选自N-连接糖基化位点、O-连接糖基化位点以及N-连接糖基化位点和O-连接糖基化位点的组合。

8.根据权利要求7所述的FIX变体，其中所述糖基化位点包含N-连接糖基化位点，所述N-连接糖基化位点包含共有序列NXT／S，条件是X不为脯氨酸。

9.根据权利要求7所述的FIX变体，其中所述糖基化位点包含O-连接糖基化位点，所述O-连接糖基化位点包含选自以下的共有序列：CXXGGT／S-C(SEQ ID NO：9)、NSTE／DA(SEQ ID NO：10)、NITQS(SEQ ID NO：11)、QSTQS(SEQ ID NO：12)、D／E-FT-R／K-V(SEQ ID NO：13)、C-E／D-SN(SEQ ID NO：14)、GGSC-K／R(SEQ ID NO：15)和它们的任意组合。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的FIX变体，其包含1-5个附加的糖基化位点。

11.载体，其包含编码根据权利要求1-10中任一项所述的FIX变体的核苷酸序列。

12.转化的细胞，其包含根据权利要求11所述的载体。

13.转基因动物，其包含根据权利要求1-10中任一项所述的FIX变体。

14.根据权利要求1-10中任一项所述的FIX变体，其中至少一个附加的糖基化位点位于激活肽之外。

15.权利要求14所述的FIX变体，其中所述至少一个附加的糖基化位点对应于FIX非人同源物的天然形式中被糖基化的位点。

16.根据权利要求15所述的FIX变体，其中所述非人同源物选自：狗、猪、牛和小鼠。

17.增加因子IX蛋白中糖基化位点数目的方法，包括：

a)比对第一FIX氨基酸序列和第二FIX氨基酸序列；

b)鉴别存在于所述第一FIX氨基酸序列而不存在于所述第二FIX氨基酸序列中的糖基化位点；

c)修饰所述第二FIX氨基酸序列以引入糖基化位点，所述糖基化位点对应于步骤b)中在所述第一FIX氨基酸序列中鉴别出的糖基化位点，

其中对所述第二FIX氨基酸序列的修饰增加了FIX蛋白中糖基化位点的数目。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述第一FIX氨基酸序列来自非人物种而所述第二FIX氨基酸序列为人FIX。

19.根据权利要求17所述的方法，其中所述第一FIX氨基酸序列中的糖基化位点位于激活肽之内。

20.根据权利要求17所述的方法，其中所述第一FIX氨基酸序列中的糖基化位点位于所述激活肽之外。

21.根据权利要求1-16中任一项所述的FIX变体，其为人FIX蛋白。

22.根据权利要求1所述的FIX变体，其中通过任意组合的以下方式引入所述一个或多个附加的糖基化位点：附加氨基酸的插入、氨基酸的缺失、氨基酸的取代和／或氨基酸的重排。