[发明专利]多级PCR检测淋病奈瑟菌的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种非诊断且非治疗性的鉴别病原体种类或型别的方法，其特征在于，包括步骤：

(a)在封闭的第一级PCR反应腔或隔室中，以含有或可能含有病原体核酸的样本为模板，通过所述病原体特异性的第一引物对进行扩增，从而获得第一扩增产物P1；

(b)将第一扩增产物从第一级PCR隔室转移至第二级PCR隔室中，作为第二级PCR的模板，并在封闭的第二级PCR隔室中，通过所述病原体特异性的第二引物对进行扩增，从而获得第二扩增产物P2；

(c)任选地，将上一步骤的扩增产物Pi从第i级PCR隔室转移至第i+1级PCR隔室中，作为第i+1级PCR的模板，并在封闭的第i+1级PCR隔室中，通过所述病原体特异性的第i+1引物对进行扩增，从而获得第i+1扩增产物P_i+1，其中i为≥2的正整数；本步骤可进行一次或多次；

(d)对前述步骤中获得的所述第二扩增产物P2或所述第i+1扩增产物P_i+1，进行测序，从而获得扩增产物的序列；和

(e)将测得的扩增产物序列与病原体标准序列进行比对，从而鉴别出病原体的种类或型别；

并且，所述病原体为细菌；

且在步骤(a)中，第一级PCR隔室中放置有可携带PCR扩增产物的固体颗粒，从而在PCR反应过程中或之后，形成携带PCR扩增产物的固体颗粒；且所述的固体颗粒是磁性微球；且在步骤(b)和(c)中，利用磁铁或电磁铁，通过所述携带PCR扩增产物的固体颗粒，将第j扩增产物P_j从第j级PCR隔室转移至第j+1级PCR隔室，其中j为≥1的正整数；

其中，该过程在多级PCR反应管中进行，所述反应管由二个或多个可封闭的PCR反应腔或隔室(10)，以及在至少两个隔室之间设有的封闭的或可封闭的连接通道(40)所组成，所述连接通道用于让携带PCR扩增产物的固体颗粒(50)从一个隔室或上游隔室转移至另一隔室或下游隔室；

且所述的隔室具有腔盖，并且对于相互连通的多个隔室而言，当各自的腔盖全部盖上后，就构成一个封闭空间，并且所述腔盖为密封盖；且在多级PCR反应开始至多级PCR反应结束期间，整个所述的多级PCR反应管处于完全封闭状态。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(b)和(c)中，将第j扩增产物P_j从第j级PCR隔室转移至第j+1级PCR隔室过程中，第j级PCR隔室和第j+1级PCR隔室都处于封闭状态，其中j为≥1的正整数，并且在第j级PCR隔室和第j+1级PCR隔室之间设有封闭的或可封闭的连接通道，所述连接通道用于让携带PCR扩增产物的固体颗粒从P_j级隔室或上游隔室转移至P_j+1级隔室或下游隔室。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(a)、(b)和(c)的整个过程中，所有的PCR隔室都处于封闭状态。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的病原体为奈瑟菌科(Neisseriaceae)细菌。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的第一引物对为C trachomatis HiFi外侧引物对即HiFi DNA Tech No.4003。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的第二引物对为C trachomatis HiFi外侧引物对即HiFi DNA Tech No.4004；且当i＝2时，第三引物对与第二引物对相同。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述病原体为奈瑟菌属(Neisseria)细菌。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述病原体为淋病奈瑟菌(N.gonorrhoeae)。