[发明专利]番茄SlEBI基因及其RNAi表达载体和应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及番茄SlEBI基因和利用该基因构建的RNAi载体及其应用，还涉及该RNAi载体的构建方法。

背景技术

番茄是一种深受人们所喜爱的世界性蔬菜。其每一台花序一般8到12朵花，且由于每一花柄处都具有离区，使得花朵在受到外力（如风、雨等）影响时极易脱落，这一特征大大限制了番茄的产量。而番茄的产量是农民们一直关注的重要问题。传统的育种方法一般通过杂交等方法增加番茄重量或延长番茄结果期来培育高产品种。该方法周期长、耗资多、增产效果并不理想且不可稳定遗传。目前，传统育种方法已不能满足番茄生产的需要。近年来，随着基因工程的迅速发展和转基因技术的日益完善，基因工程技术在培育高产番茄方面显示了极大的潜力。自1983年世界上第一例转基因作物问世以来，转基因植物的研究得到了迅速发展。1994年延熟保鲜转基因番茄在美国批准上市。目前，基因工程技术已广泛的用于番茄品种的改良和育种中。利用基因工程技术快速获得稳定遗传的番茄新品种必将是当前和未来的发展趋势。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种番茄SlEBI基因；本发明的目的之二在于提供番茄SlEBI基因核心片段；本发明的目的之三在于提供番茄SlEBI基因核心片段在培育多花高产番茄品种中的应用；本发明的目的之四在于提供番茄SlEBI基因核心片段在培育花柄无离区番茄品种中的应用；本发明的目的之五在于提供含有SlEBI基因核心片段的RNAi表达载体；本发明的目的之六在于提供含有所述RNAi表达载体的微生物转化体；本发明的目的之七在于提供RNAi表达载体的制备方法；本发明目的之八在于提供RNAi表达载体在培育多花高产番茄品种中的应用。

1,番茄SlEBI基因，核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.番茄SlEBI基因核心片段，核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。

3.所述番茄SlEBI基因核心片段在培育多花高产番茄品种中的应用。

4.所述番茄SlEBI基因核心片段在培育花柄无离区番茄品种中的应用。

5.含有所述SlEBI基因核心片段的RNAi表达载体。

优选的，所述RNAi表达载体是以pBin19载体为骨架载体，在多克隆酶切位点处插入顺序连接的CaMV35S启动子、番茄SlEBI基因核心片段的反向序列、PDK内含子、番茄SlEBI基因核心片段正向序列和Nos终止子表达框。

6.含有所述RNAi表达载体的微生物转化体。

7.所述RNAi表达载体的制备方法，包括如下步骤：

a.以含SEQ ID No.6的重组质粒为模板，以SEQ ID No.4和SEQ ID No.5为引物进行PCR扩增，将扩增产物纯化后用Cla I和Xba I双酶切，再与经同样双酶切的pHANNIBAL载体连接，获得重组质粒pHANNIBAL::SlEBI(1)；

b.按步骤a的方法进行PCR扩增，将扩增产物纯化后用Kpn I和Xho I双酶切，再与经同样双酶切的重组质粒pHANNIBAL::SlEBI(1)连接，获得重组质粒pHANNIBAL::SlEBI(2)；

c.将步骤b所得重组质粒pHANNIBAL::SlEBI(2)用Sac I和Spe I双酶切，再与经Sac I和Xba I双酶切的pBin19载体连接，得RNAi表达载体。

优选的，所述含SEQ ID No.6的重组质粒由如下方法制备，以含SlEBI基因的重组质粒为模板，以SEQ ID No.4和SEQ ID No.5为引物进行扩增，将扩增产物与pGEM-T Easy载体连接，得含SEQ ID No.6的重组质粒。

8.所述RNAi表达载体在培育多花高产番茄品种中的应用。

本发明的有益效果在于：本发明获得了番茄SlEBI基因，利用番茄SlEBI基因核心片段构建番茄SlEBI基因沉默的RNAi载体，将该RNAi载体转入番茄，所得转基因番茄阳性植株中SlEBI基因的表达均较非转基因植株显著降低，植物株型为多花及花柄无离区表型，成功获得了多花且不易落花落果的高产番茄新品种；与传统育种方法通过杂交等方法培育高产品种的周期长、耗资多、增产效果不理想且不可稳定遗传相比，本发明采用基因工程技术，高效并可稳定遗传地增加了番茄的花数，进而增加了产量，为番茄的品种改良作出了积极的探索，也为观赏植物的多花育种和其他植物的高产育种提供了参考和借鉴，所得多花高产番茄新品种具有良好的市场前景和经济价值。