[发明专利]一种鉴定小粒种咖啡与中粒种咖啡的方法有效
| 申请号： | 201310490342.1 | 申请日： | 2013-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN103540663A | 公开（公告）日： | 2014-01-29 |
| 发明（设计）人： | 王晓阳;董云萍;闫林;黄丽芳;龙宇宙;孙燕 | 申请（专利权）人： | 中国热带农业科学院香料饮料研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵;冯琼 |
| 地址： | 571533 海*** | 国省代码： | 海南;66 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴定 小粒 咖啡 中粒种 方法 | ||
1.一种鉴定小粒种咖啡与中粒种咖啡的方法，其特征在于，对待测咖啡进行DNA提取，然后采用SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示序列的引物进行PCR扩增，所得扩增产物进行凝胶电泳检测，若检测到条带为90bp和110bp双条带，则为小粒种咖啡，若检测到条带为90bp或100bp的单条带，则为中粒种咖啡。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述PCR扩增体系为：
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述PCR为普通PCR或降落PCR。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述普通PCR扩增程序为：
95℃预变性3min；
95℃变性30s、57℃复性45s、72℃延伸1min，循环35次；
72℃延伸5min，4℃保存。
5.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述降落PCR扩增程序为：
95℃预变性3min；
95℃变性30s、68℃复性45s、72℃延伸1min，循环15次，每次循环后复性温度递降1℃；
95℃变性30s、53℃复性45s、72℃延伸1min，循环25次；
72℃延伸5min，4℃保存。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述凝胶电泳检测为聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。
7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述聚丙烯酰胺凝胶电泳检测采用胶浓度为8%的变性聚丙烯酰胺凝胶进行检测。
8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述8%变性聚丙烯酰胺凝胶由210g尿素、1g甲叉、39g丙烯酰胺和50mL10×TBE定容至500mL制备获得。
9.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述聚丙烯酰胺凝胶电泳检测以1×TBE为电泳缓冲液进行1h的200v恒压电泳。
10.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述聚丙烯酰胺凝胶电泳检测采用银染法显影。
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