[发明专利]一种沙门菌的分离选取及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种沙门菌的分离选取和检测方法。

背景技术

沙门菌是重要的肠道病原菌，是食物中毒和腹泻的重要病原菌之一。

目前，检测沙门菌主要采用传统常规检测方法、分子生物学方法、免疫学方法等多种方法。传统常规检测方法：采集粪便和食品样品进行选择性增菌后使用选择性分离平板（WS、SS、BS、DHL、HE等）进行分离，在分离平板上一般需要挑选多个疑似菌落，再对其进行生化和血清学的鉴定。采用全自动细菌分析仪检测：将细菌微量生化鉴定系统与计算机相连接，细菌的鉴定结果由计算机来处理，并自动报告结果，就是微生物分析仪。待检样品增菌后培养物经过特定的处理，取一定量的处理液注入仪器检测，检测出的数据经过微机处理计算，对比微机数据库储存的数据，然后判断结果。免疫学方法有酶联免疫法(ELISA)：该方法利用抗原——抗体反应的特异性，采用预先包被了沙门氏菌(A-E群)单克隆抗体的微量板，加入经增菌处理的样品，反应后再加入显色剂，作用完毕后用酶标仪测定OD值来判定结果。ELISA法检出沙门氏菌的极限范围在10⁵-10⁶cfu／ml，因此，要得出可靠的结果，检测样品首先必须进行预增菌、选择性增菌。如酶联免疫法(ELISA)、基因芯片法、聚合酶链法(PCR)、Transia沙门菌卡片检测法等，这些方法较好的解决了沙门菌检测的特异性和敏感性问题，但是都需要昂贵的仪器设备，并且检测成本较高，并不适合大样本的筛查。

传统的常规培养分离技术虽然费时耗力，但是迄今为止不论是疾病诊断还是卫生学评价仍然是不可缺少的重要方法，是分子生物学技术等检验不能替代的。但是该方法中，在分离平板挑选疑似菌落时，大量疑似菌落的参杂需要后续的生化及血清学鉴定，费时费力，因此如何减少所挑选菌落中与目标检测的沙门菌相似菌落的数量是目前需要解决问题。

发明内容

针对上述现有技术的难题，本发明的目的是提供一种沙门菌的检测方法，减少所挑选菌落中与目标检测的沙门菌相似菌落的数量。

本发明的技术方案是这样的：

一种沙门菌的分离选取方法，其特征在于，拨动疑似菌落和挑取破碎菌落。

一种沙门菌的检测方法，包括增菌、分离培养、挑取疑似菌落、生化试验和血清学鉴定，其特征在于，所述挑取疑似菌落包括步骤：拨动疑似菌落和挑取破碎菌落。

所述拨动疑似菌落为拨动半透明中心为黑色的菌落。

所述增菌为将标本接种于亚硒酸盐增菌液，35℃～37℃培养18～24h。

所述分离培养为在WS琼脂平板上35℃～37℃培养18～24h。

本发明所提供的技术方案，提高了常规分离培养基WS平板上沙门菌疑似菌落的识别率，以减少假阳性菌落数量以减少后续不必要的繁琐的鉴定工作。在沙门菌检测工作中，掘弃大量假阳性，有利于准确检测真正的沙门菌。本方法在传统培养基WS平板上，使用特殊识别方法挑选疑似沙门菌特征明显、方法简单、容易辨认、特异性高。在大规模沙门菌筛选工作中，快速识别沙门菌，大幅度减少工作量，提高工作效率，快速检出沙门菌。肠道带菌沙门菌检测从传统的4-7天，减少到2-3天。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明，但不作为对本发明的限定。

取粪便标本0.5～1g接种于10ml亚硒酸盐增菌液（SF增菌液）35℃～37℃培养18～24h，用接种环挑取增菌液接种于选择性培养基（WS琼脂平板）上，35℃～37℃培养18～24h，从WS琼脂平板上，用接种针拨动中心黑色的可疑菌落，并挑取拨动后破碎的菌落进行生化试验和血清学鉴定。生化试验：挑取可以菌落移种于克氏双糖，并作氧化酶、硝酸盐、KCN、赖氨酸试验；或移种于沙门菌生化鉴定板；或使用微生物自动鉴定系统进行鉴定。符合沙门菌生化反应的再做血清学试验；血清学鉴定依据沙门菌O血清决定群，再用H因子血清第1相和第2相试验结果综合判定其所属血清型。本发明的发明点在于在WS琼脂平板分离培养后，挑取菌落时先拨动符合沙门菌菌落特征的可疑菌落，然后挑取这些可疑菌落中被接种针拨动破碎的菌落，来得到较小假阳性菌落的沙门菌可疑菌落，减少后续生化试验和血清学鉴定的工作量。

13278件肠检标本，采用本发明方法检出102株，常规法检出101株，敏感性对比无显著性差异（x2=0.116,p>0.05）；特异性对比本发明方法99.98%，常规法90.33%，有非常显著性差异(P<0.005)。科马嘉CAS显色培养基由于含有特殊显色物质，无需通过任何仪器，仅通过观察菌落颜色即能在24-48小时用肉眼进行判断。国外学者对508份临床标本检测分离出20株沙门菌，灵敏度为100%，特异性为88.9%。本发明方法和进口显色平板(CAS)对比试验：通过对936份体检样品检测，结果检出6株，显色平板(CAS)敏感性为100%，特异性为96.1%；本发明方法敏感性为100%，特异性为100%。