[发明专利]一株解淀粉芽孢杆菌及其液体制剂在治疗松烂皮病中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及生态学领域，尤其涉及的是一株解淀粉芽孢杆菌及其液体制剂在治疗松烂皮病中的应用。 

背景技术

松烂皮病（Cenangium ferruginosum）是世界著名松属病害，发生在2～10年生枝干上，主要为害皮层部份，苗木、幼树到成年树均可受害，轻者枝条枯死，重者全株死亡。1～3月间，部分小枝、侧枝或主干上部的针叶先变为黄绿至灰绿色，后逐渐变成褐色至红褐色，此时病枝干与健康枝干相比无明显变化。到3月末，当针叶变为红褐色时，被害枝干则明显表现出因失水而收缩起皱的病状。针叶逐渐脱落，叶痕处稍膨大。小枝被害时，则易干枯死亡，表现枯枝病状。若侧枝基部的皮部发病，侧枝则枯死下垂，呈弯曲状。主干发病时，病部开始有轻微的流脂现象，随后流脂加剧，病皮亦逐渐干缩下陷，发生溃疡呈烂皮状。患病皮层易与木质部分离。4月份，病部膨大部分破裂，在皮下生出病菌子实体即子囊盘，初为黄褐色，后呈暗褐色，逐渐变大，单生或数个簇生，到5月下旬至6月上旬即成熟。成熟的子囊盘呈杯状或盘状，雨后张开变大，表面为淡黄褐色，干后收缩变黑并僵化。目前主要采用化学防治和营林技术，而生物防治措施研究尚未涉及。化学防治虽是一种有效的防治手段，但存在病原菌抗药性、环境与食品安全、药害等许多实际问题，一些化学杀菌剂在许多发达国家和地区已严格限制使用。而与环境友好的生物农药越来越受到人们的青睐，是未来农业可持续发展的重要组成部分。 

因此，现有技术存在缺陷，需要改进。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术在治疗松烂皮病中的缺陷，提供了一株解淀粉芽孢杆菌及其液体制剂在治疗松烂皮病中的应用。 

本发明的技术方案如下： 

一株解淀粉芽孢杆菌，其分类命名为解淀粉芽孢杆菌，Bacillus amyloliquefaciens，已于2013年09月12日保藏在中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.8177。 

所述的解淀粉芽孢杆菌的液体制剂的制作方法，包括以下步骤： 

（1）一级斜面种子：常规方法制作牛肉膏蛋白胨斜面培养基，接种解淀粉芽孢杆菌后，培养制成一级种子； 

（2）二级液体种子：营养肉质培养液经高压灭菌后，在通氧控制下，按100mL液体盛于300mL三角瓶比例装瓶，在无菌状态接种解淀粉芽孢杆菌斜面种子，每瓶接种2支斜面种子，振荡培养，制成解淀粉芽孢杆菌液体种子； 

（3）液体发酵：营养肉质培养液经高压灭菌后，在通氧控制下，按200mL液体盛于500mL三角瓶比例装瓶，在无菌状态接种解淀粉芽孢杆菌液体种子，接种量为液体总体积的10%，振荡培养，制成解淀粉芽孢杆菌液体制剂，然后保存。 

所述的解淀粉芽孢杆菌的液体制剂的制作方法，其牛肉膏蛋白胨斜面培养基的成分为牛肉膏7.0g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂17g，水1000mL。 

所述的解淀粉芽孢杆菌的液体制剂的制作方法，其营养肉质培养液的成分为牛肉膏7.0g，蛋白胨10g，NaCl5g，松枝条浸渍液1000mL。 

所述的制作方法得到液体制剂。 

所述的液体制剂在治疗松烂皮病中的应用，是将病斑刮除干净，用无菌棉球蘸取液体制剂稀释液对发病部位进行涂抹，间隔7d一次，共5次。 

所述的液体制剂在治疗松烂皮病中的应用，其液体制剂稀释液为将液体制剂稀释成1×10⁹cfu/mL的液体制剂，然后再稀释100倍。 

本发明能够有效治疗松烂皮病。 

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。 

1、内生细菌的分离、纯化与保存 

在四川广元市朝天区核桃根腐病发生地采集健康核桃根系，带回实验室分离。采回的样本用无菌水冲洗干净，称取1.0g根组织，用70%的酒精消毒30s，无菌水洗3次后，再用4%的NaClO消毒3min后，无菌水洗3次，吸取最后一次洗涤液100μl涂抹NA平板（牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂粉15-20g，蒸馏水1000ml，pH7.0，混匀分装后121℃高压灭菌30min），28℃黑暗培养24h，用于表面消毒的对照，检查表面消毒是否彻底。