[发明专利]一种龙爪柳茎的增殖方法

权利要求书

1.一种龙爪柳茎的增殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）外植体的选取，包括以下子步骤：

（1-1）每年4～10月选取龙爪柳当年生嫩茎的形态学上端4～5节，每一节作为一个外植体，冰袋保存；

（1-2）将（1-1）中取得的外植体上叶片的形态学上端剪去，保留叶片的形态学下端0.5～1cm；

（2）外植体灭菌，包括以下子步骤：

（2-1）将（1）处理过的外植体以流动水冲洗；

（2-2）将（2-1）中处理后的外植体移至超净工作台中进行以下操作：

①用75%酒精对外植体进行表面灭菌30～60s，后用灭菌水冲洗酒精灭菌后的外植体；

②在不断摇动的条件下，用0.5～1%次氯酸钠溶液对①处理后的外植体进行灭菌，6～8min；

③用灭菌水冲洗经②处理后的外植体；

（3）接种、培养，包括以下子步骤：

（3-1）将步骤（2）处理后的外植体的形态学下端插入培养基中，每个培养基中接种4个外植体，置于组织培养室中在以下培养条件下培养：温度27℃，光照3000lx，14小时光周期；

（3-2）继代培养：（3-1）中接种的外植体约2周后腋芽开始膨大，3～4周后腋芽抽出新叶，5～6周外植体长至3cm长后，继代至与（3-1）中所用培养基配比相同的培养基中进行继代培养，培养3个月左右，外植体长至10～15cm，得到继代龙爪柳茎；

（3-3）增殖培养：将（3-2）中继代培养得到的继代龙爪柳茎取出，按照其节数，将每节叶片的形态学上端剪去，保留叶片的形态学下端0.5～1cm，移至与（3-1）中所用培养基配比相同的培养基中进行增殖培养；

（4）重复步骤（2）～（3）；

其中，

所述培养基包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

2.根据权利要求1所述的一种龙爪柳茎的增殖方法，其特征在于，所述培养基包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

3.根据权利要求1所述的一种龙爪柳茎的增殖方法，其特征在于，所述培养基包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

4.根据权利要求1所述的一种龙爪柳茎的增殖方法，其特征在于，所述培养基由以下步骤制得：

（1）调节MS培养基pH至5.8～6.0，加入琼脂粉，后于121℃下高温蒸汽灭菌20～30min，冷却至50～60℃待用；

（2）萘乙酸和玉米素灭菌待用；

（3）将（2）中灭菌后的萘乙酸和玉米素加入步骤（1）中制备的琼脂-MS中，凝固制备完成。

5.根据权利要求1所述的一种龙爪柳茎的增殖方法，其特征在于，所述灭菌方式为通过滤膜过滤灭菌，其中，滤膜孔径为0.22μm。

6.一种用于龙爪柳茎增殖的培养基，其特征在于，包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

7.根据权利要求6所述的用于龙爪柳茎增殖的培养基，其特征在于，包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

8.根据权利要求6所述的用于龙爪柳茎增殖的培养基，其特征在于，包括：

其中，所述g/L是基于每升培养基所述成分的重量。

9.根据权利要求6所述的用于龙爪柳茎增殖的培养基，其特征在于，通过以下步骤制备得到：

（1）调节MS培养基pH至5.8～6.0，加入琼脂粉，后于121℃下高温蒸汽灭菌20～30min，冷却至50～60℃待用；

（2）萘乙酸和玉米素灭菌待用；

（3）将（2）中灭菌后的萘乙酸和玉米素加入步骤（1）中制备的琼脂-MS中，凝固制备完成。

10.根据权利要求6所述的用于龙爪柳茎增殖的培养基，其特征在于，所述灭菌方式为通过滤膜过滤灭菌，其中，滤膜孔径为0.22μm。