[发明专利]一种单酶催化植物油制备天然香料的方法

权利要求书

1.一种单酶催化植物油制备天然香料的方法，其特征在于包括以下步骤：

a）、先将植物油进行水解，得到浓度为50~500 mg/mL的植物油水解产物；

b）、取上述2.5~25uL植物油水解产物加入到0.25~2.5mL浓度为20~30mg/L的双功能酶蛋白溶液中，混匀后在18~22℃下震荡反应0.5~2.5h；

c）、在上述反应液中加入0.25~2.5mL乙醚，4~10℃避光震摇萃取50~70min，收集上层有机相；并在下层相中再加入乙醚重复抽提1~3次，然后合并上层有机相，并加入1~5g无水硫酸镁充分干燥；

d）、将得到的有机溶剂相进行10~20℃低温下旋转蒸发浓缩获得天然香料；

所述步骤b）中的双功能酶蛋白溶液为一种具有氢过氧化物裂解功能的脂氧合酶PhLOX；

所述脂氧合酶PhLOX的cDNA，它的核苷酸序列如SEQID NO.1所述；它的氨基酸序列如SEQID NO.2所述。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤a) 的植物油水解的具体过程为：取100~500mg植物油，加2~5mL含5~7%（wt）KOH的甲醇水溶液，充氮气1~2min后55~65℃水浴1.5~2.5h；冷却，加1:0.9~1.1（v/v）的HCl水溶液调节pH至小于1；再加2~5mL 1:3~5（v/v）的氯仿/正己烷混合液抽提，3~5℃，9000~11000rpm离心4~6min，取上层有机相，余下混合液再重复抽提1~3次，合并有机相，氮气吹干后用1mL色谱甲醇定容。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为3~5：1。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤c）的乙醚萃取的具体过程为：在酶反应液中加1:0.9~1.1（v/v）的乙醚震荡混匀，3~5℃，9000~11000rpm离心4~6min，取上层有机相，余下混合液再重复萃取1~3次，合并有机相，加1~5g无水硫酸镁充分干燥。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤d) 获得的天然香料为C5、C6、C7、C8、C9-烯醛类化合物。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述植物油为葵花籽、玉米油、芝麻油或者大豆油。