[发明专利]用于检测牛奶中β-内酰胺酶的方法及检测试纸

说明书

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，具体为一种用于检测牛奶中β-内酰胺酶的方法及试纸条。

技术背景

β-内酰胺酶(β-lactamase)是常见的市售解抗剂中的主要成分，它由革兰氏阳性细菌产生和分泌，可选择性地分解用于牛奶中的β-内酰胺类抗生素，是我国不允许使用的食品添加剂。

为了防止奶畜养殖的过程中乳房炎等常见疾病，β-内酰胺类抗生素是被经常使用的抗生素药物之一。而国家规定在生鲜乳收购环节中需要检测抗生素，并要求不得超过最高残留限量。如果超标，按规定乳品企业不允许收购这些生乳。在经济利益的驱使下，市场上开始出现人为添加β-内酰胺酶来分解抗生素、从而使抗生素超标奶变为合格产品的违法情况。

β-内酰胺酶的违规使用不利于政府和乳品企业监管β-内酰胺类抗生素的滥用，而抗生素的滥用会造成人体产生药物耐药性等多种不良后果，所以必须禁用β-内酰胺酶。

2009年我国在少数乳制品中检查出含有β-内酰胺酶。当年，国家卫生部等九部门组成了专项小组，为配合全国打击违法添加非食用物质和滥用食品添加剂专项整治工作的深入开展，将β-内酰胺酶列入《食品中可能违法添加的非食用物质名单》，并展开了全国范围内的监管。

目前国内现有的标准方法由卫生部及有关科研院所提出，包括杯碟法、液相色谱-质谱/质谱法、碘量法三种检验方法。但是这些方法均有操作复杂、耗时长和检测成本高的特点，所以市场上也陆续开始出现适合企业现场快速筛选的方法和产品。而快检产品中，进口产品占据了绝大多数的市场份额。这些进口快检产品价格昂贵，检测限一般为4U/mL，检测结果判断不直观，且整个检测过程时间较长，极大地增加了企业和政府部门等客户的经济成本。

为了维护广大消费者的身体健康、尽可能地节省国家政府部门和乳品企业的检测成本，市场急需一种灵敏度高、操作简便、用时短、更加经济有效的β-内酰胺酶检测方法及其相应产品的出现。

发明内容

本发明目的是提供一种灵敏度高、操作简便、用时短、更加经济有效的用于检测牛奶中β-内酰胺酶的方法及检测试纸。

为达上述目的，提供了如下的技术方案：

一种用于检测牛奶中β-内酰胺酶的方法，利用β-内酰胺酶反应底物与牛奶中存在的β-内酰胺酶反应，产生青霉噻唑酸；所述青霉噻唑酸取代青霉噻唑酸-BSA，与胶体金上包被的抗青霉噻唑酸单克隆抗体结合。

作为一个优选的方案，检测步骤为：

（1）、所述β-内酰胺酶反应底物与牛奶反应，形成反应液；

（2）、将所述反应液与所述胶体金中包被有的所述抗青霉噻唑酸单克隆抗体进行反应；

（3）、反应后，加入所述青霉噻唑酸-BSA，观察反应结果。

作为进一步的优选的方案，所述检测步骤皆采用水浴加热。

作为另一个优选的方案，所述胶体金为冻干的胶体金。

本发明还提供了一种β-内酰胺酶检测试纸，包括：样品垫、硝酸纤维膜、吸水垫和支撑胶板，所述硝酸纤维膜上有检测线和质控线；所述检测线包被青霉噻唑酸-BSA，所述质控线包被羊抗鼠IgG。

作为进一步的优选的方案，所述青霉噻唑酸-BSA的浓度是0.05～1mg/mL。

作为另一个进一步的优选的方案，所述羊抗鼠IgG的浓度是0.1～5mg/mL。

与现有技术相比，本发明的检测方法与检测试纸的优点为：

1.灵敏度高，可以检测牛奶中大于等于4U/mL的β-内酰胺酶，适用于国家标准中规定的检测上限标准，与目前市场上占主要份额的进口产品灵敏度一致，甚至更高。

2.检测方法与检测试纸的操作步骤都十分简单，很大程度上缩短了检测用时。

3.检测试纸采用消线法判断结果，与采用比色法判断结果相比更直观，不易产生混淆。

附图说明

图1为本发明的检测原理示意图；

图2为本发明试纸条结构示意图；

图3为本发明检测方法的操作过程流程图；

图4为本发明的检测试纸结果判定为阴性的示意图；

图5为本发明的检测试纸结果判定为阳性的示意图；

图6为本发明的检测试纸结果无效的示意图。

具体实施方式

为使本发明的技术手段、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。

1.青霉噻唑酸与载体蛋白的偶联