[发明专利]提取乳酸菌基因组DNA的试剂盒及相应的提取方法

权利要求书

1.一种提取乳酸菌基因组DNA的试剂盒，其特征在于它包括以下试剂： 

  Buffer-1为质量百分比为10%的十二烷基硫酸钠溶液；

  Buffer-2为150～200mg/mL 的溶菌酶，用无菌水配制；

  Buffer-3为15～20mg/mL的蛋白酶K，用20mM Tris-HCL配制，其pH值为7.5；

  Buffer-4为10mol/L CTAB，由4.1g NaCl溶于80mL水中，再缓慢加入10g CTAB 配制而成；

  Buffer-5为5M NaCl溶液；

  Buffer-6为10mM Tris-HCl，1 mM EDTA，0.1mg/mL RNaseA；

其它试剂：体积比为25:24 :1的苯酚：氯仿：异戊醇混合的抽提液；

  异丙醇；

  体积百分比为70%的乙醇。

2.一种提取乳酸菌基因组DNA的方法，其特征在于它按照以下步骤顺序进行：

（1）取对数生长期的乳酸菌菌液3mL，于12000rpm离心1min收集菌体，菌体用Buffer-6洗涤两次，后用500μL Buffer-6重悬菌体，得菌体悬浊液1；

（2）将菌体悬浊液1中加入50μL Buffer-1和20μL Buffer-2溶液，37℃，温箱温育1h，裂解细胞壁，得菌体悬浊液2；

（3）将菌体悬浊液2中加入10 μL Buffer-3，混匀后于55℃温箱过夜消化，使蛋白变质或降解，得菌体悬浊液3；

（4）将菌体悬浊液3中加入100μL Buffer-4和100μL Buffer-5溶液，混匀，65℃水浴加热15min，沉淀蛋白，得菌体悬浊液4；

（5）用等体积的抽提液将菌体悬浊液4抽提基因组DNA，除去蛋白，12000rpm离心10min，取上清液，得上清液5，再使用等体积的抽提液将上清液5抽提基因组DNA，除去蛋白，12000rpm离心10min，取上清液，得上清液6；

（6）将上清液6用0.8倍体积的异丙醇沉淀基因组DNA，得沉淀7； 

（7）沉淀7用70%乙醇洗涤沉淀2次，抽干后用30 μL Buffer-6溶解沉淀，最终得乳酸菌基因组DNA溶液。