[发明专利]IL-6基因PCR检测引物

说明书

 

技术领域

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及IL-6因子基因检测技术。

背景技术

白细胞介素6（IL-6），主要由单核巨噬细胞、T细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞产生，主要作用包括：刺激活化B细胞增殖，分泌抗体；活化T细胞增殖及CTL活化；刺激肝细胞合成急性期蛋白，参与炎症炎症反应；促进血细胞发育。IL-6是肝脏和急性期反应的重要调节因子。目前，研究发现的疾病中与IL-6异常表达有关，包括免疫异常性疾病：临床表现为发热、淋巴结肿大、血沉加快、急性期蛋白增高、高球蛋白白血症、自身抗体阳性等症状；亚急性甲状腺炎发作期间。另外，IL-6水平升高还与急慢性炎症、烧伤、移植排斥等相关。

目前，对IL-6血清水平的检测主要通过ELISA进行检测，但是本方法中使用特异性抗体价格较高，操作周期长，不适合对并病人治疗过程中IL-6指标实时定点检测。本发明提供一种IL-6基因检测引物，利用PCR检测技术定量和定性的检测IL-6基因表达，简单快捷，适合推广使用。

发明内容

为了解决上述现有技术的不足，本发明提供了IL-6基因PCR检测的引物。

本发明所采用的技术方案如下：

IL-6基因PCR检测引物：

正向引物(SEQ ID NO:1)：5-GGCCCTTGCTTTCTCTTCG-3

反向引物（SEQ ID NO:2：5-ATAATAAAGTTTTGATTATGT-3；

本发明的技术效果如下：

所用的引物针对IL-6的mRNA水平进行检测，提取血细胞的mRNA，并反转录为cDNA作为检测样品，运用实时荧光PCR方法进行检测，得出IL-6的表达水平，作为判断免疫异常性疾病或急慢性炎症的判断依据，具有良好的特异性和实用性。

附图说明

图1是实施例1的实时荧光PCR检测曲线。

具体实施方式

具体结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1：

根据IL-6基因的cDNA进行设计PCR检测引物，引物序列如下：

正向引物(SEQ ID NO:1)：5-GGCCCTTGCTTTCTCTTCG-3

反向引物（SEQ ID NO:2：5-ATAATAAAGTTTTGATTATGT-3；

检测步骤：

1）提取mRNA：

   其中取免疫异常性疾病病人3例的血清，标记为1、2、3，取亚急性甲状腺炎的病人1例，标记4，取急性炎症病人2例，标记为5、6；阴性对照2例正常人血清。离心分离，并提取血液mRNA（全血mRNA提取试剂盒，罗氏公司），并反转录为cDNA， 

2）制备实时荧光PCR检测反应体系20微升：

取步骤1）中cDNA溶液2微升，加入10微升SYBR Premix Ex Taq(2×)、正向引物10μM、反向引物10μM、Rox  Dye（50×）0.4微升；并补加无菌水至20微升。

3）进行反应，反应温度如下：

预变性95℃ /100s，1 次循环；变性95℃ /30s，延伸66℃ /120s，40 次循环。

其中如附图1所示的PCR扩增曲线，其中以高于阴性对照的荧光0.245696设置阈值绘制PCR扩增曲线；图1的扩增曲线表明，病人1、2的实时荧光PCR曲线高于阴性对照和其他4个病例，3、4高于急性炎症病人。并且6位病例中的IL-6基因表达情况高于阴性对照。

                         SEQUENCE LISTING

 

<110>  余龙, 唐

 

<120>  IL-6基因PCR检测引物

 

<130>  2013

 

<160>  2    

 

<170>  PatentIn version 3.5

 

<210>  1

<211>  19

<212>  DNA

<213>  人工合成

 

<400>  1