[发明专利]一种萌发菌液体菌种菌丝球碎化处理方法

权利要求书

1.一种萌发菌液体菌种菌丝球碎化处理方法，其特征在于：该方法包括制备母钟、摇瓶静置培养、摇瓶震荡培养、碎化处理和接种六步骤即可得到栽培用种。 

2.根据权利要求1所述的一种萌发菌液体菌种菌丝球碎化处理方法，其特征在于：包括以下步骤： 

1）制备母种：将菌种块接种到试管PDA培养基中，置于20-30℃环境中避光培养6-16天； 

2）摇瓶静置培养：将步骤1）中培养的母种切成3～5mm的小块，用接种刀挑起菌丝体部，接种到摇瓶中，并使其悬浮在液面上，每瓶接入量为5—10块，将接好种的摇瓶静置在放在20～30℃的恒温箱中培养4-14天； 

3）摇瓶震荡培养：将步骤2）中摇瓶静置培养放在频率为200r/min、温度20～30℃的震荡摇床上培养，使菌种在摇瓶中震荡培养2～12天，得到直径为2cm左右的菌丝球； 

4）碎化处理：将步骤3）中培养好的摇瓶转移到频率为500r/min的电磁搅拌器上作5～15个周期搅拌，得到40～60%的碎化菌丝体； 

5）接种：将碎化菌丝体接入固体栽培袋，在20～30℃黑暗条件下培养30～35天可得到栽培用种。 

3.根据权利要求1、2任意一项所述的一种萌发菌液体菌种菌丝球碎化处理方法，其特征在于：包括以下步骤： 

1）制备母种：将菌种块接种到试管PDA培养基中，置于24-27℃环境中避光培养8-12天； 

2）摇瓶静置培养：将步骤1）中培养的母种切成3～5mm的小块，用接种刀挑起菌丝体部，接种到摇瓶中，并使其悬浮在液面上，每瓶接入量为5～10块，将接好种的摇瓶静置在放在22～27℃的恒温箱中培养6-10天； 

3）摇瓶震荡培养：将步骤2）中摇瓶静置培养放在频率为200r/min、温度23～27℃的震荡摇床上培养，使菌种在摇瓶中震荡培养6～10天，得到直径为2cm左右的菌丝球； 

4）碎化处理：将步骤3）中培养好的摇瓶转移到频率为500r/min 的电磁搅拌器上作5～10个周期搅拌，得到40～60%的碎化菌丝体； 

5）接种：将碎化菌丝体接入固体栽培袋，在20～26℃黑暗条件下培养30～35天可得到栽培用种。 

4.根据以上任意一项权利要求所述的一种萌发菌液体菌种菌丝球碎化处理方法，其特征在于：包括以下步骤： 

1）制备母种：将菌种块接种到试管PDA培养基中，置于25℃环境中避光培养11天； 

2）摇瓶静置培养：将步骤1）中培养的母种切成3～5mm的小块，用接种刀挑起菌丝体部，接种到摇瓶中，并使其悬浮在液面上，每瓶接入量为5～10块，将接好种的摇瓶静置在放在27℃的恒温箱中培养11天； 

3）摇瓶震荡培养：将步骤2）中摇瓶静置培养放在频率为200r/min、温度26℃的震荡摇床上培养，使菌种在摇瓶中震荡培养8天，得到直径为2cm左右的菌丝球； 

4）碎化处理：将步骤3）中培养好的摇瓶转移到频率为500r/min的电磁搅拌器上作8个周期搅拌，得到40～60%的碎化菌丝体； 

5）接种：将碎化菌丝体接入固体栽培袋，在26℃黑暗条件下培养34天可得到栽培用种。 

5.根据权利要求2、3或4任意一项所述的一种萌发菌液体菌种菌丝球碎化处理方法，其特征在于：所述的PDA培养基包含马铃薯、葡萄糖、蛋白胨、琼脂和水。 

6.根据权利要求5所述的所述的一种萌发菌液体菌种菌丝球碎化处理方法，其特征在于：所述的PDA培养基包含马铃薯200份、葡萄糖30份、蛋白胨15份、琼脂40和水1000份。 

7.根据权利要求5或6所述的所述的一种萌发菌液体菌种菌丝球碎化处理方法，其特征在于：所述的所述的PDA培养基在1.3～1.7kPa下进行密闭灭菌30min。 

8.根据权利要求5或6所述的所述的一种萌发菌液体菌种菌丝球碎化处理方法，其特征在于：所述的PDA培养基的pH值设置在5.6～5.9。 

9.根据权利要求2、3或4任意一项所述的所述的一种萌发菌液 体菌种菌丝球碎化处理方法，其特征在于：所述的摇瓶培养液由蛋白胨0.2%，葡萄糖0.1%，磷酸二氢钾0.01%，硫酸镁0.01%，牛肉膏0.01%，维生素B1、B2各0.1克，加20%马铃薯汁组成。 

10.根据权利要求9所述的所述的一种萌发菌液体菌种菌丝球碎化处理方法，其特征在于：所述的摇瓶培养液的pH值设置在5.6～5.9。