[发明专利]一种用于鉴定小麦面粉色泽相关基因的PCR体系

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于鉴定或辅助鉴定面粉色泽相关基因的PCR体系及其应用，特别涉及一种用于鉴定或辅助鉴定待测新疆冬小麦的面粉色泽相关基因如Psy-B1和TaZds-A1的多重PCR引物对组、试剂盒及其应用。

背景技术

小麦面制食品作为我国人民最重要的主食之一，为我国以面食为主地区的人民提供50-80%以上的能量来源。随着社会生活水平不断提高，人们对小麦面制品品质的要求越来越高，品质育种也越来越受到重视。中国作为小麦最大的生产国和消费国，每年仅用来生产面条的小麦量约占小麦总消费量的40%。而面条、馒头、饺子等我国传统的蒸煮类面制食品，色泽越白越受到我国消费者青睐。因此，在我国传统面制品的感官评价体系中，面制品的色泽占很大的比例，越白评分越高。然而，目前我国主栽小麦品种的面粉平均白度较低（74.8），不能满足市场和消费者对面粉白度（80.0以上）的要求。在2005年前，大多数面粉厂为满足消费者对面粉白度的要求，向面粉中添加过氧化苯甲酰（BPO）。但BPO会破坏营养物质且对人类健康构成威胁，在国家最新修订的小麦粉标准中，已明确规定禁止使用BPO。因此制订育种目标，选育出自然白的小麦具有重要意义。同时，亮黄色的面粉也有一定的消费量，如黄碱面条、乌冬面、意大利面等也很受欢迎。因此，根据不同的加工目的，分别需要选育适合加工高白度或亮黄色面粉的小麦新品种。

除了环境、增白剂、加工方式和栽培措施等外，小麦面粉及面制品颜色的形成主要受色素类物质和氧化还原酶类等遗传物质的影响。色素类物质主要包括黄色素（Yellow pigment,YP）和棕色素（Brown pigment），黄色素主要由类胡萝卜素（Carotenoid）和类黄酮（Flavonoid）组成，面粉中的氧化酶类主要包括多酚氧化酶（Polyphenol oxidase,PPO）、脂肪氧化酶（Lipoxygenase,LOX）和过氧化物酶（Peroxidase,POD）。YP含量、LOX及PPO活性对面粉及面制品的色泽有重要影响。YP含量与面团黄度的相关系数高达0.8-0.9；LOX可催化多不饱和脂肪酸加氧形成过氧化物，反应所释放的氧自由基进一步氧化色素分子，使面粉变白；PPO在氧分子的参与下可催化单酚类物质最终变为氧合醌，生成褐色物质，决定面粉及面制品加工和贮存过程中色泽褐变的50-70%。当需要自然白小麦时，应选择含低YP含量基因型、高LOX活性基因型及低PPO活性基因型的小麦品种（系）。

多重PCR是一种高效、低成本的检测方法，已成为研究的热点。虽然已经报道了数套与小麦面粉色泽基因相关的多重PCR体系，但仅涉及到PPO活性基因的Ppo-A1和Ppo-D1位点，或PSY活性基因的Psy-A1位点，还未见到检测PSY活性基因的Psy-B1位点、ZDS活性基因的TaZds-A1和TaZds-D1位点，以及LOX活性基因TaLOX-B1位点的多重PCR体系的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于鉴定或辅助鉴定面粉色泽相关基因的PCR体系及其应用，特别涉及一种用于鉴定或辅助鉴定待测新疆冬小麦的面粉色泽相关基因如Psy-B1和TaZds-A1的多重PCR引物对组、试剂盒及其应用。

本发明所提供的用于鉴定或辅助鉴定待测小麦拉面品质性状相关基因的多重PCR引物对组为如下a1）或a2）的引物对组：

a1）由引物对组A和引物对组B组成的引物对组；

a2）引物对组A；

所述面粉色泽相关基因为Psy-B1基因、TaZds-A1基因、TaZds-D1基因和Ppo-A1基因。

所述引物对组A由特异于所述Psy-B1基因的两个引物对，和特异于所述TaZds-A1基因的一个引物对组成；具体的，所述特异于所述Psy-B1基因的两个引物对分别为序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的引物对1，以及序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的引物对2；所述特异于所述TaZds-A1基因的一个引物对为序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成的引物对3；

所述引物对组B由特异于所述TaZds-D1基因的一个引物对，和特异于所述Ppo-A1基因的一个引物对组成；具体的，所述特异于所述TaZds-D1基因的一个引物对为序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成的引物对4；所述特异于所述Ppo-A1基因的一个引物对为序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA组成的引物对5。