[发明专利]2型糖尿病的血清miRNA生物标志物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域，涉及一种用于2型糖尿病检测和早期诊断的基于血清miRNA的生物标志物及其表达量的检测方法。

背景技术

糖尿病是一种重要的内分泌代谢慢性病，糖尿病患者人数正在全球快速增长，已成为继心血管疾病、肿瘤之后的危害人类健康的第三大非传染性疾病。根据WHO的建议，糖尿病可以分为1型糖尿病、2型糖尿病、特异性糖尿病和妊娠糖尿病。

2型糖尿病也叫成人发病型糖尿病，多在35～40岁之后发病，占糖尿病患者90%以上。目前，用于2-型糖尿病诊断和分类的指标包括：空腹血糖（FPG）、口服糖耐量试验2小时血糖（OGTT2h）、糖化血红蛋白HbA1c以及包括多尿、烦渴和无其他诱因的体重下降的典型糖尿病症状。但是，这些方法主要用于已罹患糖尿病的诊断和分型，无法进行早期诊断和罹患风险评估。关于2-型糖尿病的临床诊断标准，我国目前采用WHO（1999年）糖尿病诊断标准（表1）。

表1糖代谢分类

IFG或IGT统称为糖调节受损（IGR，即糖尿病前期）。

miRNA是一类非编码的RNA，miRNA是基因表达的重要调控因子，在生物的生长、发育和分化以及各类疾病的发生发展过程中扮演着不同的角色，miRNA在糖代谢和脂代谢调控中起着非常重要的作用。miRNA通过结合在靶mRNA的3＇-非编码区的特异性位点上来抑制翻译或使靶mRNA降解。循环miRNA作为癌症、心血管疾病等的诊断和预后的分子标志物有着很好的应用前景。

miRNA与胰岛素生成、胰岛素分泌、胰岛素活性及胰岛的发育等都密切相关，在糖尿病的发病过程中可能起着非常重要的作用。虽然关于miRNA与糖尿病发病机制之间的关系研究已取得很多进展，大多数是糖尿病动物模型和患病组织中miRNA表达情况及功能研究，有关糖尿病人血清miRNA的研究还比较少，有待进一步深入。

2-型糖尿病尤其是易感人群的监测和罹患风险评估是采取早期干预措施和有效遏制当前全球糖尿病爆发趋势的强大保障。尽管目前对2-型糖尿病的相关诊断标准有OGTT2h和HbA1c，但是目前临床上对2-型糖尿病的早期诊断和罹患风险评估仍然缺乏有效手段，需要敏感而特异性的无创性的血清学指标，尤其是基于miRNA的无创性指标。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一类用于2-型糖尿病早期诊断和罹患风险评估的血清miRNA标志物，利用该血清miRNA生物标志物可用于诊断受试者是否罹患2-型糖尿病或2-型糖尿病早期诊断和罹患风险评估。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种血清miRNA组合物，为以下血清miRNA：hsa-miR-23a，hsa-let-7i，hsa-miR-486中的至少一种（即为任意一种、或任意两种的组合、或3种的组合）：

hsa-miR-23a的miRNA序列为：AUCACAUUGCCAGGGAUUUCC；

hsa-let-7i的miRNA序列为：UGAGGUAGUAGUUUGUGCUGUU；

hsa-miR-486的miRNA序列为：UCCUGUACUGAGCUGCCCCGAGC。

作为本发明的miRNA组合物的改进：血清miRNA组合物包括：hsa-miR-23a，hsa-let-7i和hsa-miR-486（即，由hsa-miR-23a，hsa-let-7i和hsa-miR-486组成）。

本发明还同时提供了一种用于2-型糖尿病检测的荧光定量检测引物组合物，该引物组合物包括权利要求1所述血清miRNA组合物中各miRNA的检测引物；

各miRNA的RT引物、FW引物（正向引物）和RV引物（反向引物）的序列如下：

作为本发明的用于2-型糖尿病检测的荧光定量检测引物组合物的改进：荧光定量检测引物包括：hsa-miR-23a，hsa-let-7i和hsa-miR-486三种miRNA的检测引物。

本发明还同时提供了上述血清miRNA组合物在制备2-型糖尿病及糖尿病前期的诊断试剂或工具中的应用。

本发明还同时提供了上述血清miRNA检测引物在制备2-型糖尿病及糖尿病前期的诊断试剂或工具中的应用。

本发明还提供了miRNA表达量的检测方法及其应用。本发明提供了检测血清miRNA生物标志物的基于茎环的反转录-荧光定量PCR技术（SYBR Green染料法）。