[发明专利]乳酸粪链球菌的发酵方法

权利要求书

1.一种乳酸粪链球菌的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）一、二、三级培养基的配制：按质量比为100:6:12:20:20:20分别称取牛心浸液、氯化钠、蛋白胨、猪肝浸液、羊肝浸液和葡萄糖，将牛心浸液、氯化钠、蛋白胨、猪肝浸液和羊肝浸液混合得到混合液A，向混合液A中添加碳酸钠调节混合液A的pH至7.2-7.4，然后将混合液A煮沸过滤后得到滤液A，将葡萄糖添加到滤液A中搅拌均匀得到混合液B，分别取15ml混合液B作为一级培养基、取150ml混合液B作为二级培养基、取800ml混合液B作为三级培养基，其中，一级培养基中添加有质量为15ml混合液B质量1.5-2%的琼脂，一、二、三级培养基经115℃蒸汽灭菌25min后，再空白培养24h，最后置于冰箱保存备用，冰箱温度控制在4-8℃；

2）一、二、三级种子培养：取乳酸粪链球菌作为菌种接入空白斜面试管内并在37-39℃下培养18-20h得到斜面菌种，其中，所取的乳酸粪链球菌的质量与步骤1）中牛心浸液的质量比为0.5:100；将得到的斜面菌种接入一级培养基中并在37-39℃下培养18-20h得到一级种子，将一级种子接入二级培养基中并在37-39℃下培养18-20h得到二级种子，将二级种子接入三级培养基中并在37-39℃下培养18-20h得到三级种子；

3）发酵罐培养液的配制：按质量比为9:9:72:20:20:18:72：400:1400分别称取牛肉膏、氯化钠、蛋白胨、猪肝浸液、羊肝浸液、碳酸钙、葡萄糖、纯化水A和纯化水B；将称量好的纯化水A、牛肉膏、氯化钠和蛋白胨加入夹层锅内，打开夹层锅的蒸汽阀，加热搅拌使其充分溶解，加热温度为80-85℃，再将称量好的猪肝浸液和羊肝浸液加入到夹层锅内，搅拌均匀得到混合液C，通过向混合液C中添加碳酸钠调节混合液C的pH至7.2-7.4，最后过滤混合液C得到滤液B；将滤液B以及称量好的纯化水B、碳酸钙、葡萄糖加入发酵罐中搅拌均匀得到培养液A，对培养液A进行121℃蒸汽灭菌25min后，放冷至37-40℃；

4）发酵罐内培养液的发酵：将步骤2）中得到的三级种子加入到发酵罐内的培养液A中，三级种子与培养液A的质量比为1:580，然后在39-41℃培养16-18h，培养过程中每隔1h开动发酵罐搅拌一次，每次搅拌10min，等发酵罐内的碳酸钙完全消失时，发酵完成即可放罐。

2.根据权利要求1所述的一种乳酸粪链球菌的发酵方法，其特征在于：所述的牛心浸液制备方法如下：取新鲜的牛心，除去脂肪、筋膜及血管，切细绞碎得到牛心肉末，取牛心肉末并加纯化水，纯化水的添加量为每3g牛心肉末添加10ml纯化水，将添加纯化水的牛心肉末置于冰箱中浸渍18h以上，冰箱温度控制在4-8℃，然后取出水浴加热至肌肉凝结成饼状并浮于液面，水浴加热温度控制在98-100℃，浸液呈澄明淡黄色，放冷至室温，过滤得到的滤液即为所述的牛心浸液；猪肝浸液、羊肝浸液的制备方法与牛心浸液的制备方法相同。

3.根据权利要求1或2所述的一种乳酸粪链球菌的发酵方法，其特征在于：在步骤2）中，作为菌种的乳酸粪链球菌是从直接购买或实验室保存的乳酸粪链球菌斜面挑去少许菌落划线于培养基平皿上培养，反复多次，最后选取平皿上的大菌落，转接到试管斜面内并在37-39℃下培养18-20h得到斜面菌种。