[发明专利]多价肺炎球菌多糖-蛋白质缀合物组合物

权利要求书

1.用于制备多价免疫原性组合物的方法，所述多价免疫原性组合物包含13种不同的多糖－蛋白质缀合物和生理学上可接受的载体，其中每种缀合物含有缀合到载体蛋白的不同的荚膜多糖，并且其中从肺炎链球菌的血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F制备荚膜多糖，其中所述血清型3多糖－蛋白质缀合物根据包括步骤

(a)使纯化的血清型3多糖与选自乙酸、柠檬酸或碳酸的温和的酸反应，得到水解的血清型3多糖；

(b)在二价阳离子的存在下使水解的血清型3多糖与氧化剂反应，得到活化的血清型3多糖，其中所述的氧化剂是高碘酸且二价阳离子是Mg^2＋或Ca^2＋；

(c)使活化的血清型3多糖与载体蛋白混合；

(d)使混合且活化的血清型3多糖和载体蛋白与还原剂反应，得到血清型3多糖:载体蛋白缀合物；和

(e)封闭血清型3多糖:载体蛋白缀合物中未反应的醛，得到包含与载体蛋白共价连接的肺炎链球菌血清型3多糖的免疫原性缀合物；

其中所述载体蛋白选自：白喉类毒素；破伤风类毒素、百日咳类毒素、霍乱类毒素、大肠杆菌LT、大肠杆菌ST、来自铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的外毒素A；外膜复合体c(OMPC)、孔蛋白、转铁蛋白结合蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎球菌表面蛋白A(PspA)、肺炎球菌黏附素蛋白(PsaA)、来自A组或者B组链球菌的C5a肽酶、流感嗜血杆菌蛋白D；卵白蛋白；匙孔血蓝蛋白（KLH）；牛血清白蛋白（BSA）或者结核菌素的纯化的蛋白质衍生物（PPD），

的方法制备，并且其中在纯化各糖缀合物后，将它们混合以配制所述免疫原性组合物。

2.权利要求1的用于制备多价免疫原性组合物的方法，其中还包括在与载体蛋白混合的步骤(c)前纯化活化的血清型3多糖。

3.权利要求1的用于制备多价免疫原性组合物的方法，还包括在与还原剂反应的步骤(d)前，共同冻干所述混合且活化的血清型3多糖和载体蛋白。

4.权利要求1的用于制备多价免疫原性组合物的方法，其中步骤(a)中所述的温和的酸是乙酸。

5.权利要求1的用于制备多价免疫原性组合物的方法，其中所述的载体蛋白是CRM₁₉₇。

6.权利要求1的用于制备多价免疫原性组合物的方法，其中步骤(d)所述的还原剂是氰基硼氢化钠。

7.权利要求1的用于制备多价免疫原性组合物的方法，其中步骤(e)中封闭未反应的醛包括使血清型3多糖:载体蛋白缀合物与硼氢化钠反应。