[发明专利]用于细胞凋亡调解子基因(BIM)缺失突变的检测方法及其检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属分子生物学和医学领域，涉及细胞凋亡调解子基因(BIM)缺失突变的检测方法及其检测试剂盒，具体涉及一种用于检测BIM基因第三、第四外显子之间的内含子上2903bp缺失突变的检测方法及其检测试剂盒。 

背景技术

现有技术公开了BIM基因是编码细胞凋亡基因BCL2蛋白家族中的一个成员,在细胞凋亡中发挥重要的调节作用。研究表明BIM基因外显子3和外显子4之间存在的2903bp的缺失会造成BIM亚型BH3结构缺乏表达。而这种缺乏表达会导致肺癌病人对部分治疗药物有更强的耐药性。有研究表明，在癌症病人体内，这种删除与药物反应的持续时间相关联，并且能够被用来预测病人在没有疾病恶化时的存活时间，如携带这种删除突变的患者的平均无疾病恶化存活期限为大约6个半月时间，而没有这种突变的患者则为12个月左右。因此，业内认为BIM缺失的检测对于肺癌患者有相当重要的现实意义。 

目前，临床实践中对BIM基因突变检测的方法主要包括：电泳、测序、变性高效液相色谱（DHPLC）、荧光定量PCR法、基因芯片、液相芯片等方法。其中，测序法由于可以读到DNA每个碱基的变化，目前被认为是检测基因突变的金标准方法，但因为该方法存在灵敏度低的缺陷，检测异质性较高的临床肿瘤组织样本时假阴性率高，同时，还存在测序步骤繁琐、耗时长，对设备和操作人员要求较高等缺陷，因此，不易形成标准化操作的临床诊断产品。另外，DHPLC、基因芯片、液相芯片等方法也存在操作复杂，对设备要求高等缺陷，因此，目前仅应用用科研单位实验室。 

综上所述，为了临床最终实现治疗肺癌的目标，本领域迫切需要寻求简单易行，快速高效的检测肺癌相关基因的方法、试剂盒，以及相关治疗药物。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种检测（包括早期诊断）BIM基因缺失情况的方法及其检测试剂盒。具体涉及一种检测细胞凋亡调解子基因(BIM)缺失突变的方法及其检测试剂盒，尤其是检测BIM基因上第三、第四外显子之间内含子上2903bp缺失突变的方法及其检测试剂盒。 

本发明方法简单易行，快速高效，成本低廉。 

本发明的一种检测BIM基因缺失情况的方法,具体即检测BIM基因第三、第四外显子之间的内含子上2903bp缺失突变情况，缺失型个体相对普通人群对某些药物的耐药性更高。 

本发明所述的2903bp缺失，位于BIM基因第三、第四外显子之间的内含子上（脱氧核糖核酸（DNA）序列编号：2903bp缺失位置基于SEQ ID NO：1/5、1/6，上游引物基于SEQ ID NO:2/5、2/6；下游引物1基于SEQ ID：3/5；下游引物2基于SEQ ID：4/6；扩增产物基于SEQ ID：5/6、6/6。 

具体而言，本发明的检测细胞凋亡调解子基因(BIM)缺失突变的方法,其包括步骤： 

（a）抽提样品的基因组DNA，扩增获得BIM基因第三、第四外显子之间的内含子上包括2903bp缺失在内的产物； 

（b）检测步骤（a）产物中2903bp缺失情况。 

本发明中，所述的扩增BIM基因第三、第四外显子之间的内含子上2903bp缺失的引物序列如SEQ ID NO2和SEQ ID NO3所示。 

上述方法中涉及的扩增、抽提基因组DNA等技术均可采用本领域的常规操作方法。 

本发明还提供了检测BIM基因缺失情况的检测试剂盒，它含有与BIM基因第三、第四外显子之间的内含子上2903bp缺失区域结合的探针，所述试剂盒还可以包括特异性扩增BIM基因第三、第四外显子之间的内含子上2903bp缺失区域的引物；在本发明的一个实施例中，与特异性扩增BIM基因第三、第四外显子之间的内含子上2903bp缺失区域的引物的序列如SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3所示。 

本发明中，检测BIM基因缺失情况,即检测BIM基因第三、第四外显子之间的内含子上2903bp缺失突变情况，相关研究表明缺失型个体相对普通人群对某些药物的耐药性更高； 

本发明的方法中，包括检测某个体的BIM缺失情况的步骤，以此判断某个体是否存在有耐药可能性高于普通人群的差异。 

在本发明的一优选例中，所述的差异是选自2903bp的缺失情况，2903bp的缺失位于BIM基因第三、第四外显子之间的内含子上，其中脱氧核糖核酸（DNA）序列编号：2903bp缺失位置基于SEQ ID NO 1/6。 

更进一步的，本发明提供了检测样品中是否存在BIM基因第三、第四外显子之间的内含子上2903bp缺失的方法，其包括步骤：