[发明专利]高效液相色谱检测磺酸苯肼硫酸盐系列的方法

说明书

技术领域

本发明涉及磺酸苯肼硫酸盐系列的检测方法，具体地指一种高效液相色谱检测磺酸苯肼硫酸盐系列的方法。

背景技术

目前，检测苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐采用亚硝酸钠为标准溶液的重氮反应滴定法，但是该类方法操作繁琐，而且检测结果的准确性、灵敏度和重现性无法满足实际工作的需要。

发明内容

本发明的目的就是要克服现有技术所存在的不足，提供一种高效液相色谱检测磺酸苯肼硫酸盐系列的方法。

为实现上述目的，本发明高效液相色谱检测磺酸苯肼硫酸盐系列的方法，高效液相色谱检测磺酸苯肼硫酸盐系列的方法，包括下述步骤：

1）色谱条件：所用色谱柱的填料为SinoChrom ODS-BP，其尺寸为250mm柱长×4.6mm内径，5μm粒径；流动相为体积比为10：90的乙腈和离子对缓冲溶液，所述离子对缓冲溶液为1升二次蒸馏水+1.7克十二烷基磺酸钠+1.0ml磷酸；紫外可见检测器的检测波长为254nm；柱温为30℃，流动相速度为1.0mL/min；

2）溶液的配制：标准样品用乙腈配制成含有磺酸苯肼硫酸盐系列0.05～0.3mg/mL的标准溶液，待测样品用乙腈溶解后，经超声过滤定容，制得待测溶液；

3）测定：将标准溶液和待测溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析。

本发明的有益效果在于：相对于采用亚硝酸钠为标准溶液的重氮反应滴定法，具有操作简便、灵敏度高、重复性好、检测结果可靠的特点。本发明能快速有效地分离杂质。

附图说明

图1为采用本发明检测方法所得苯肼-2-磺酸硫酸盐标样的色谱图。

图2为采用本发明检测方法所得苯肼-3-磺酸硫酸盐标样的色谱图。

图3为采用本发明检测方法所得苯肼-4-磺酸硫酸盐标样的色谱图。

图4为采用本发明检测方法所得液相色谱基线图。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细描述。

本发明实施例中所用的苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐系列标准样品为美国USP公司产品，其纯度99.9%。流动相乙腈、磷酸为色谱级，十二烷基磺酸钠为分析纯，样品系湖北神舟化工有限公司生产。

本发明实施例中所用的仪器为岛津高效液相色谱仪，SPD-10AVP Plus紫外可见检测器，LC—10AT VP PLUS单元低、高压溶剂输送泵，7725i型手动进样器，HS2000色谱工作站。

检测波长的确定：在200～400nm波长范围内扫描，发现在254nm处有最大吸收，故选254nm为检测波长，在该波长处检测灵敏度较高。

流动相的确定：对苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐进行液相色谱分析时，如采用甲醇-水流动相等体系，分离效果明显不如使用乙腈：离子对缓冲溶液体系，选择了乙腈：离子对缓冲溶液作为流动相，经试验样品稳定不发生变化，分离效果好。故流动相优选乙腈：离子对缓冲溶液体积比为10：90。

经过试验，本发明的液相色谱条件：所用色谱柱的填料为SinoChrom ODS-BP，其尺寸为250mm柱长×4.6mm内径，5μm粒径；流动相为体积比为10：90的乙腈和离子对缓冲溶液，离子对缓冲溶液为1升二次蒸馏水+1.7克十二烷基磺酸钠+1.0mL磷酸；紫外可见检测器的检测波长为254nm；柱温为30，℃流动相速度为1.0mL/min，分析时间20.0min。

标准工作曲线的绘制：

分别称取标准样品苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐20.0mg置于25mL容量瓶中，加乙腈充分溶解定容。摇匀，吸取该溶液3.0ml移入25mL容量瓶中，加乙腈充分溶解定容。配制浓度为0.08mg/mL、0.10mg/mL、0.15mg/mL、0.20mg/mL、0.25mg/mL苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐标准溶液，取20.0μL标准溶液注入高效液相色谱仪，按色谱条件进行测定分析，测得苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐标准溶液的相关峰面积。以色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对应的浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线。