[发明专利]DUSP-9基因在检测肾透明细胞癌中的应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及DUSP-9基因在检测肾透明细胞癌中的应用。 

背景技术

肾透明细胞癌(ccRCC)是全球范围分布的一种常见的泌尿系统恶性肿瘤。尽管近年来ccRCC治疗上有巨大的提升，但是发病率仍在逐渐升高，30%的ccRCC患者最初表现为转移，高达40%的患者经历肾切除术仍发展为局部复发或转移。虽然已经发现环境和遗传因素与ccRCC的发生是相关的，但ccRCC发生和发展的具体分子机制仍不清楚。DUSP-9 (双特异性磷酸酶-9)属于双特异性蛋白磷酸酶亚科。DUSP-9是促分裂原活化蛋白激酶家族中的一个负调节酶(如：ERK，JNK，p38)，它与细胞的增殖和分化相关。大规模平行测序研究已经证明了ccRCC患者中DUSP-9的表达是下调的。然而，目前没有公开发表的相关报告。因此，DUSP-9的表达水平和临床重要性之间的关系尚需阐明。我们本次研究主要是想探究ccRCC患者中DUSP-9的表达及其临床实践价值。 

发明内容

本发明的目的在于公开了DUSP-9基因在检测肾透明细胞癌中的应用。 

本发明的目的是通过以下技术方案实现的： 

DUSP-9基因在检测肾透明细胞癌中的应用。

上述技术方案所述的DUSP-9基因在检测肾透明细胞癌中的应用，其中DUSP-9基因在肾透明细胞癌中低表达。 

上述技术方案所述的DUSP-9基因在检测肾透明细胞癌中的应用，包括下述步骤： 

(1)、取样本肾组织，提取肾组织的RNA；

(2)、对样本的肾组织RNA进行逆转录，得到样本肾组织的cDNA；

(3)、以步骤(2)获得的肾组织cDNA为模版，以引物对P为引物，进行RT-PCR反应，将样本肾组织中的DUSP-9基因的mRNA表达量与正常肾组织中的DUSP-9基因的mRNA表达量进行对比，当样本中DUSP-9基因的mRNA表达量低于正常DUSP-9基因的mRNA表达量时，该样本为肾透明细胞癌样本；其中引物对P为：

DUSP-9编 码 链：5’-TATGCCACGCCCTTTGAG-3’， 

DUSP-9非编码链：5’-CACAGCAGGATGTAGGAGATGA-3’。

上述技术方案所述的DUSP-9基因在检测肾透明细胞癌中的应用，其中，所述RT-PCR的条件为：50°C 2分钟和95°C 2分钟，1个循环；95°C 15秒、55°C 30秒和72°C 40秒，40个循环。 

上述技术方案所述的DUSP-9基因在检测肾透明细胞癌中的应用，其中，所述的应用是通过对肾组织样本进行免疫组化测定，当肾组织样本的染色指数≤4时，该肾组织样本中DUSP-9低表达，该样本为肾透明细胞癌样本。 

本发明具有以下有益效果： 

1、本发明通过实验揭示了DUSP-9基因在肾透明细胞癌患者中低表达，为肾透明细胞癌患者的诊断提供了一种新的诊断性指标；

2、本发明通过实验(如表2的分析P值＜0.005)揭示了DUSP-9基因可以作为判定DUSP-9预后的独立性指标；

3、本发明揭示了DUSP-9基因与肾透明细胞癌之间的关系，在常用的肾肿瘤诊断病理报告中，可以将DUSP-9的表达分析加入，作为判定患者预后的指标；在切片的过程中，对肿瘤染色会用到免疫组化过程，同时细胞染色过程简易方便，结合染色程度和染色后阳性(及染色后的细胞)细胞比例来得出染色指数，≤4为预后不良，≥5为预后良好；可以尽最大可能的减少实验的复杂程度，更加良好的判定患者的病理类型及预后。

附图说明： 

图1为46 例ccRCC肿瘤样本和相邻正常肾组织样本的DUSP-9基因表达的RT-PCR分析；

图2为107例ccRCC患者肿瘤组织和相邻正常组织的免疫组化分析；

图3为DUSP-9蛋白质表达的免疫组化分析中相邻正常肾组织样本与ccRCC肿瘤组织样本的不同染色情况；

图4为由Kaplan-Meier分析和时序测试所得到的DUSP-9的表达对生存的影响。

具体实施方式

为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体试验例对本发明DUSP-9基因在检测肾透明细胞癌中的应用作进一步的说明。 

试验例1：DUSP-9基因在检测肾透明细胞癌中的应用： 

一、病例样本及试剂：

1、病人和组织标本：