[发明专利]SSR引物组及其利用该引物组鉴定辣椒品种的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，具体来说是一种引物及其利用该引物鉴定辣椒品种的方法。

背景技术

品种鉴定是农业生产、作物育种和种子检验上的重要方法，也是保护作物品种、防止假冒伪劣品种进入市场的重要手段。传统的种子质量检验方法有田间性状鉴定和籽粒形态鉴定等，但是，田间性状鉴定所需周期长，耗费大量人力、物力和财力。辣椒种子质量监控是辣椒生产的重要环节。在辣椒生产中，地方品种混杂现象严重，常规鉴别耗时较长，田间鉴别难度较大，随着分子生物学技术的飞速发展，分子标记技术不断成熟，给作物从品种基因组水平上的鉴定开辟了途径。

发明内容

为实现上述辣椒品种鉴定中出现的问题，本发明的目的在于，提出辣椒品种鉴定的分子检测方法，该方法利用分子标记技术，在苗期实现辣椒品种鉴定，具有周期短，成本低，结果可靠，节约人力，物力及土地资源，大大提高了品种鉴定的准确性。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种SSR引物组，该SSR引物组序列如下：

本发明的另一目的是提供一种利用SSR引物组鉴定辣椒品种的方法，包括如下步骤：

（1）辣椒叶片DNA提取；

（2）PCR扩增；

（3）电泳检测；

（4）数据记录；

（5）结果判定。

进一步的，所述步骤（2）中PCR扩增程序为94℃预变性5min；94℃变性45s，60℃复性45s，72℃延伸1min，35个循环；最后72℃延伸10min，4℃保存。

进一步的，所述步骤（2）中PCR扩增体系包括包括20ng模板DNA，2.5mmol/L Mg2+，0.2mmol/L dNTPs，1U TaqDNA聚合酶，每条引物400nmol/L，10×Buffer。

进一步的，所述步骤（5）结果判定时，如果两个品种（品系或者自交系）在两个或两个以上SSR标记位点具有不同等位，则判定为不同品种。

本发明的有益技术效果是：本发明引物特异性高，扩增效率好，能快速鉴定辣椒的不同品种，具有周期短，成本低，结果可靠，节约人力、物力及土地资源特点。

附图说明

图1本发明方法检测H224、H137、H089、H204、H042023A、H009、H015、H004、H102、H042025D共10个自交系电泳结果图；

图2利用本发明检测香辣四号、元辣华帅、元辣红丰及曼迪金条电泳结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施实例对本发明做进一步说明

实施实例1

（1）辣椒基因组DNA提取：选用H224、H137、H089、H204、H042023A、H009、H015、H004、H102、H042025D共10个本研究所自育自交系材料，待苗期采集植株新鲜幼嫩叶片2～3g，采用改进的CTAB方法提取DNA样品。具体步骤为：①用1.5ml离心管盖取幼苗叶片（约12～15mg），置于冰上；②加抽提液100μl，研磨成浆；③65℃水浴20-40min，其间颠倒离心管两次；④取出微离心管，放置5-10min，冷至室温；⑤加入100μl的苯酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），上下颠倒混合5min，3200-12000rpm离心10min；⑥转移上清至另一1.5ml离心管，加入7.5μl5mol/L NaCl，用100μl无水乙醇（冰冻或室温）沉淀DNA；⑦短暂离心，除去乙醇，用75%乙醇洗涤，12000rpm离心5min，弃乙醇，自然干燥至没有乙醇气味；⑧加入200μl灭菌ddH2O或TE(pH=8.0)，4℃保存待用。

（2）以提取的辣椒基因组DNA为模板，利用筛选出的20对SSR引物进行PCR扩增。