[发明专利]适配体修饰的纳米金探针及其试剂盒与在检测PDGF-BB中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种适配体修饰的纳米金探针及其试剂盒在检测PDGF-BB中的应用。

背景技术

血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor，PDGF）是一种强效的丝裂原和重要的促肿瘤血管生成生长因子，可由多种血细胞、组织细胞和一些肿瘤细胞产生。目前对肿瘤细胞中PDGF表达与检测的研究已成为生物医学研究领域的热点之一。适配体是具有三维空间结构能特异性识别目标蛋白质的DNA或RNA分子，合成容易，易于修饰且稳定。我们利用适配体功能化的纳米金可以实现对血小板衍生生长因子-BB(即PDGF-BB)的特异识别。

纳米金具有优良的表面催化特性，当金属离子和还原剂分子吸附到其表面时，纳米金催化氧化还原反应并在其表面形成一层金属膜。基于此原理，我们合成了适配体修饰的纳米金探针，通过其催化金属沉积实现对PDGF-BB的高灵敏，特异性可视化分析检测。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种适配体修饰的纳米金探针，用于PDGF-BB的检测。

本发明还要解决的技术问题，是提供包含上述功能化纳米金材料的试剂盒，用于PDGF-BB的检测。

本发明最后要解决的技术问题，是提供上述试剂盒在检测PDGF-BB中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种适配体修饰的纳米金探针，它以直径为20-30nm的纳米金球为内核，金球外表面键合有适配体链和寡核苷酸链；

其中，所述的适配体链为：

5’-SH-(CH₂)₆-TTTTTTCAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTG；

其中，所述的寡核苷酸链为：

5’-SH-(CH₂)₆-TTTTTTTTTTTTTTT-3’。

上述适配体修饰的纳米金探针的制备方法，它包括如下步骤：

(1)将150mL，2.2mM的柠檬酸钠溶液煮沸，然后迅速加入1mL，25mM的HAuCl₄溶液，溶液颜色先从黄色变为蓝灰色最终形成粉红色的金种，反应10min后将温度下降到85～95℃，加入1mL25mM的HAuCl₄溶液反应25～40min；重复加入1mL25mM的HAuCl₄溶液反应25～40min的步骤1～4次，最后搅拌使其自然冷却至室温，4℃保存；

(2)将适配体链和寡核苷酸链按摩尔比(1～99):(1～9)加入步骤(1)得到的纳米金溶液中，静置10～24小时，适配体链和寡核苷酸链的总摩尔量与纳米金摩尔量之比为(100-1000):1；

所述的适配体链为：

5’-SH-(CH₂)₆-TTTTTTCAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTG；

所述的寡核苷酸链为：

5’-SH-(CH₂)₆-TTTTTTTTTTTTTTT-3’；

(3)向步骤(2)得到的混合体系中加入PBS缓冲溶液，使得混合体系中的PBS缓冲溶液的浓度为0.1×PBS，静置3～10小时；

(4)向步骤(3)得到的混合体系中加入1～5mol/L氯化钠溶液，静置2～4小时，重复加入氯化钠溶液与静置的步骤1～4次，使得氯化钠的终浓度为0.1～0.3mol/L；

(5)将步骤(4)得到的混合体系静置24～72小时；

(6)将步骤(5)得到的溶液经离心去除上清，取沉淀加入1×PBS缓冲溶液重悬，重复离心与重悬的步骤2～4次，1×PBS缓冲溶液每次的加入体积为待加入的混合体系体积的0.1～5倍；最后离心得到的沉淀用1×PBSM缓冲溶液重悬即得备用探针。

步骤(2)中，适配体链和寡核苷酸链摩尔比优选为(1～10):(1～1:10)，最优选为1:1；静置时间优选为15～20h，最优选为18h；适配体链和寡核苷酸链的总摩尔量与纳米金摩尔量之比优选为（200～300）:1，最优选为288:1。