[发明专利]一种维生素K2及其制备方法

权利要求书

1.一种维生素K2的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取黄杆菌HNA12-D接种于斜面培养基中，30～38℃下培养24小时进行活化，然后置于4℃下保藏2～15天，获得活化的黄杆菌HNA12-D的斜面保藏菌；

（2）取上述斜面保藏菌接种于种瓶培养基中，在30～38℃下摇瓶培养24～48小时，获得种瓶培养物；

（3）取种瓶培养物接种于发酵培养基中，置于28～38℃下发酵培养120～144小时，获得发酵液，发酵培养期间每隔20～30小时补加营养物质，所述营养物质为甘油、蛋白胨和维生素K2生物合成的前体物质；

（4）取上述发酵液，加入絮凝剂进行絮凝，离心，收集沉淀，获得湿菌体；

（5）将湿菌体放在-15℃低温下冷冻3～10分钟，然后在室温中融化；

（6）重复上述步骤（5）2～6次，使湿菌体的细胞经反复冻融而破碎，获得破碎菌体；

（7）取上述破碎菌体，先用有机溶剂进行萃取，获得维生素K2粗品，再用大孔吸附树脂对维生素K2粗品进行粗分，最后用硅胶柱精制，获得维生素K2的纯品提取液；

（8）将上述纯品提取液干燥，获得所述维生素K2的纯品。

2.如权利要求1所述的一种维生素K2的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）的斜面培养基配方为：甘油8～12g/L，蛋白胨8～12g/L，酵母提取物1.5～4.5g/L，氯化钠2～6g/L，磷酸氢二钾2～10g/L，硫酸镁0.1～4g/L，琼脂20g/L；

所述步骤（2）的种瓶培养基配方为：甘油4～10g/L，蛋白胨4～10g/L，酵母提取物1.5～3.5g/L，氯化钠2～5g/L，磷酸氢二钾2～8g/L，硫酸镁0.05～5g/L；

所述步骤（3）的发酵培养基配方为：甘油4～10g/L，蛋白胨4～10g/L，酵母提取物1.5～3.5g/L，氯化钠2～5g/L，磷酸氢二钾2～8g/L，硫酸镁0.05～5g/L，聚氧乙烯油醚0.5～1.5g/L。

3.如权利要求1所述的一种维生素K2的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，斜面保藏菌的接种量为每50mL种瓶培养基接种0.1～0.5立方厘米的斜面保藏菌。

4.如权利要求1所述的一种维生素K2的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，种瓶培养物的接种量占发酵培养基的体积百分比为4～10%。

5.如权利要求1所述的一种维生素K2的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，营养物质添加的重量百分比为：甘油0.05～0.15%，蛋白胨0.05～0.15%，前体物质0.005～0.05%，所述前体物质为异戊二烯、多聚异戊二烯、松柏油、松香、1,4-二羟基-2-萘甲酸、1-羟基-2-萘甲酸、甲萘醌、对苯醌、对羟基萘中的一种或多种。

6.如权利要求1所述的一种维生素K2的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中的絮凝剂为明矾、聚合氯化铝、聚丙烯酰胺、亚铁氰化钾或硫酸锌。

7.如权利要求1所述的一种维生素K2的制备方法，其特征在于，所述步骤（7）中的有机溶剂为正己烷、异丙醇、甲醇、正丁醇中的一种或多种。

8.如权利要求1所述的一种维生素K2的制备方法，其特征在于，所述步骤（7）中的大孔吸附树脂的型号为HZ8l6、HZ807、HZ806、HZ818或HZ820。

9.如权利要求1所述的一种维生素K2的制备方法，其特征在于，所述步骤（7）的硅胶柱精制中，洗脱溶剂为体积比为10～20：1的正己烷与乙酸乙酯混合液，洗脱流速为0.5～4.5BV/h。

10.一种利用如权利要求1～9任一所述的维生素K2的制备方法制备获得的维生素K2，其特征在于，所述维生素K2的组分为MK-4、MK-5或MK-6中的一种或多种。