[发明专利]Flt-3 Ligand作为快速估算电离辐射剂量生物指标的应用

说明书

1技术领域

本发明属于电离辐射生物剂量估算领域。具体涉及Flt-3Ligand作为估算电离辐射剂量生物指标的应用。 

2背景技术

科技的快速发展，使放射源和辐射技术在工农业、医学和教学甚至军事等领域也广泛应用。然而，核技术在造福人类的同时，也对公共安全与公众健康构成了潜在的威胁。急性放射病是这种威胁的集中体现。急性放射病是电离辐射致伤的一种确定性效应，亦是最严重的辐射生物学效应，其特性是损伤随着辐射剂量的增加而增大。然而，中度以上骨髓型放射病(＞2Gy)存在假愈期，如果没有准确估算实际所受照射剂量，容易耽误治疗，最终造成生命的损失。因此，快速、准确估算辐射剂量范围具有重要意义。 

与物理剂量计相比，生物剂量计能更直观地反映电离辐射对机体的损伤程度。近年来，随着细胞和分子生物学的迅猛发展，国内外对电离辐射生物剂量计的研究取得了一定的进展，包括染色体畸变、淋巴细胞微核、早熟凝集染色体和荧光原位杂交等细胞遗传学分析以及基因突变、小卫星DNA位点突变和线粒体DNA缺失的检测等分子生物学分析研究，但传统的生物剂量计分析方法取样相对复杂，需要无菌操作，且要求细胞培养，检测周期长，通常需要2～3天，在实际应用中，有一定的局限性。因此有必要寻找新型、快速、可靠的电离辐射生物剂量指标。 

Flt-3Ligand(Flt-3L)是Flt-3(FMS-like tyrosine kinase3)的配体，鼠和人Flt-3L分别含有231和235个氨基酸。开始的27个氨基酸(鼠)或26个氨基酸(人)组成信号肽，成熟蛋白质不含此序列。以下其顺序为细胞外区(鼠161个氨基酸，人156个氨基酸)，跨膜区(鼠22个氨基酸，人23个氨基酸)以及胞浆区(鼠21个氨基酸，人30个氨基酸)。鼠和人Flt-3L均含有两个N端糖基化位点。在氨基酸水平，鼠和人Flt-3L蛋白有72％的同源性，细胞外区的同源性(73％)高于细胞内区(57％)。近年的研究发现，Flt-3L具有显著的辐射防护作用。Gratwohl的实验证实，成年家兔经14Gy照射后，给予生理盐水注射，100％的动物在照射后2周内死亡，给予G-CSF治疗，12.15％的动物能够存活，若给予Flt-3L治疗，91.17％的动物存活，说明Flt-3L对辐射具有显著的保护作用。Flt-3L的这种作用主要是抑制辐射引起的造血干/祖细胞的凋亡，促进造血干/祖细胞的增殖，Flt-3L对辐射所致骨髓功能抑制的治疗作用，具有重要的临床应用价值。Flt-3L对干细胞损伤的保护作用被认为是机体对辐射损伤的一种保护作用，研究表明：急性辐射所致的Flt-3L上升与白细胞下降呈反比，随着辐照后7天内白细胞下降程度增加，Flt-3L上升也增强。相同地，当接受不同程度屏蔽 小鼠遭受X射线照射时，Flt-3L的上升强度与X射线累积剂量相关，即无屏蔽＞1/3屏蔽＞2/3屏蔽＞3/3屏蔽。提示我们：Flt-3L上调与辐射剂量和时间相关，通过快速检测不同时间段Flt-3L上调的量可诊断出所受辐照的剂量，即可作为快速估算辐射剂量的生物指标使用，具有一定的方法创新和实际应用意义。 

3发明内容

本发明目的在于提供Flt-3L作为估算电离辐射剂量生物指标的应用。 

为了达到上述目的，本发明采用的技术方案是：血清或血浆中Flt-3L含量作为估算电离辐射剂量生物指标的应用。 

一种估算电离辐射剂量的方法，包括以下步骤： 

步骤一：样本采集：辐照后一定时间，取血，留存血清或血浆样本。 

步骤二：样本检测：检测样本中Flt-3L含量。 

步骤三：统计分析：根据已知的Flt-3L含量、照后时间，和辐照剂量，经二次响应曲面分析，获得得时间-剂量-效应二次响应曲面，并拟合剂量估算公式。 

步骤四：剂量估算：根据统计拟合曲面及公式，已知Flt-3L含量、照后时间，估算电离辐射剂量。 

上述技术方案中，血清或血浆样本来源于哺乳动物。 

上述技术方案中，辐射剂量以累积剂量为准。 

上述技术方案中，Flt-3L含量检测可以通过ELISA、芯片或其它生物检测手段实现。 

上述技术方案中，Flt-3L含量可以联合其它指标，共同估算辐射剂量。 

本发明与已有技术相比，具有如下显著特征： 

(1)样本采集方便，只需采集外周血，保存血清或血浆样本即可。 

(2)样本需要量少，检测只需100μl血清或血浆。 

(3)样本保存方便，24h内保存在4℃，长期保存在-80℃。