[发明专利]一种熊胆粉纯化方法

权利要求书

1.一种熊胆粉纯化方法，其特征在于，包括如下顺序进行的步骤：

（1）在新鲜提取的熊胆汁中加入聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和无菌水蒸馏水，震荡混匀，静置澄清，获得上清液；

（2）在步骤（1）中所得上清液中加入2倍体积的无水乙醇，制得熊胆醇提物；

（3）将步骤（2）所得熊胆提纯物加入大孔硅胶柱子，利用2倍体积75%无水乙醇分3次对硅胶柱子进行洗涤，收集洗涤液；

（4）用无菌蒸馏水对步骤（3）中所得洗涤液进行稀释，使得无水乙醇的浓度为16.5％；

（5）将步骤（4）中所得含有16.5%无水乙醇的熊胆汁上清液加入到纤维素粉CF11柱子中，涡旋振荡混匀，进行熊胆汁分离，5000rpm条件下，离心5min，离心结束后，在纤维素粉CF11柱子中加入等体积的无菌蒸馏水，5000rpm条件下，离心5min；

（6）收集步骤（5）中所得上清液，加入1/10体积的3mol/L NaAc和等体积的异丙醇，混匀，-20℃沉淀，沉淀完成后，4℃条件下，12000rpm离心30min，弃上清，收集沉淀；

（7）加入75%无水乙醇对步骤（6）中收集的沉淀进行洗涤，洗涤结束后，在4℃环境下，12000rpm离心30min，弃上清，收集沉淀；

（8）将步骤（7）中所得沉淀，溶于蒸馏水中，搅拌1至3小时，制成熊胆溶液，调节pH为2至8，加热至50℃并保持该温度，加入复合蛋白酶，酶解结束后，灭酶，进行超滤膜过滤，获得的上清液经喷雾干燥后即可获得熊胆粉成品。

2.根据权利要求1所述的一种熊胆粉纯化方法，其特征在于，所述步骤（1）中熊胆汁、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及无菌水蒸馏水的重量比为100：0.1～0.8：300～600，静置时间为2～3h。

3.根据权利要求1所述的一种熊胆粉纯化方法，其特征在于，所述步骤（5）中利用纤维素粉CF11柱子对熊胆汁进行分离包括以下步骤：

A)按照重量比为1：3.5：3.6：2.2：2.8的比例，将纤维素粉CF11粉末与氯化钠、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸钠、蒸馏水在搅拌作用下混合，制得纤维素粉CF11柱子；

B) 将含有16.5%无水乙醇的熊胆汁上清液加入到纤维素粉CF11柱子中，涡旋振荡混匀，进行熊胆汁分离，5000rpm离心5min，离心结束后，在纤维素粉CF11柱子中加入等体积的无菌蒸馏水，5000rpm条件下，离心5min；

C)收集步骤B）中所得上清液。

4.根据权利要求1所述的一种熊胆粉纯化方法，其特征在于，所述步骤（8）中复合蛋白酶为中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶及动物蛋白水解酶中的两种或两种以上的复合酶。

5.根据权利要求1所述的一种熊胆粉纯化方法，其特征在于，所述步骤（8）中酶浓度与熊胆溶液之比为800U/g～6000U/g，酶解时间1～6h，上清液喷雾干燥过程中，控制过筛目数为120～160目，进风温度为160℃～220℃，出风温度为40℃～70℃，最大水分蒸发量为5Kg/h～2000Kg/h，雾化盘最大转速为10000r/min～50000r/min。