[发明专利]一种用于人畜共检的狂犬病病毒抗体胶体金检测试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种胶体金检测试纸条，尤其是一种用于人畜共检的狂犬病病毒抗体胶体金免疫层析检测试纸条，本发明还涉及该试纸条的制备方法。

背景技术

狂犬病是由狂犬病病毒（RV）引起的人畜共患传染病，人和动物一旦发病，致死率将近100%。狂犬病主要感染途径为人被病兽或带毒动物咬伤，在我国死亡人数最多的三大传染病中，狂犬病死亡人数仅次于艾滋病，超过结核病名列第二，可见狂犬病的预防控制工作十分重要。狂犬病毒疫苗可以有效的防范狂犬病毒的感染，是防治狂犬病的重要手段。而判断接种疫苗后是否已产生保护效力就要依托于对狂犬病病毒抗体滴度的检测。目前，虽然已有大量检测狂犬病抗体的方法，但各种检测方式都存在一定的弱点，如操作复杂、操作条件苛刻、成本昂贵等。免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，具有快速简便、特异敏感、稳定性强、可保存实验结果、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点，很好地解决了其他检测方法的问题。

中国专利公开号为101930003A和中国专利公开号为101852803A的专利申请中均提到利用葡萄球菌白蛋白（SPA）标记金颗粒，而狂犬病病毒蛋白包被检测线。实验中发现此方法中，对狂犬病病毒蛋白的浓度、纯度以及用量要求很高。同样达到检测下限，狂犬病病毒蛋白包被检测线所需量约是其标金所需量的10-12倍；相同量蛋白分别应用于标记金颗粒和包被检测线两种检测模式，所显示出的灵敏度差异巨大，如表格1所示。另外，由于狂犬病病毒蛋白纯化技术并不成熟，在提高蛋白浓度的同时会出现严重的假阳性；而利用狂犬病病毒蛋白标记金颗粒可以有效提高灵敏度，减少蛋白用量，避免假阳性的出现，从而很大程度上降低了狂犬病病毒蛋白的纯化难度及成本，更有利于市场推广。另外，本专利中采用的间接法另一特点在于质控线的设置。大多文献及专利中很少用抗原标记金颗粒的原因可能在于此方法在质控线的设置上存在困难。许多文献中以狂犬病病毒多抗作为质控线，实验过程中发现，若用抗原所对应的多抗包被质控线则与检测线存在竞争关系而可能导致质控线出线不稳定，如表格2所示。为避免质控线不稳定问题，并保证检测线的灵敏度及特异性，本专利采用双层金标法，引入卵白蛋白及卵白蛋白抗体分别进行标记金颗粒和包被质控线，两者成本低，纯化技术成熟，与SPA不存在交叉，可有效解决质控线问题。

基于以上几个特点，本专利市场推广可行性较高，特别适合于广大基层单位、医院及野外作业人员使用，便于及时监测人或动物的健康状况，因此该技术具有巨大的发展潜力和应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够提高检测灵敏度和降低检测成本的用于人畜共检的狂犬病病毒抗体胶体金免疫层析检测试纸条，本发明还提供该试纸条的制备方法。

上述目的是通过以下技术方案实现的：

一种用于人畜共检的狂犬病病毒抗体胶体金免疫层析检测试纸条，包括金标结合区和检测区，所述检测区上设有检测线和质控线，所述金标结合区包被胶体金标记的狂犬病病毒抗原及卵白蛋白金颗粒，所述检测线包被葡萄球菌白蛋白，所述质控线包被卵白蛋白抗体。

一种用于人畜共检的狂犬病病毒抗体胶体金免疫层析检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：

1）向pH值为7-7.5的胶体金的溶液中加入狂犬病病毒抗原和封闭剂，得到胶体金标记的狂犬病病毒抗原，再通过差速离心对其进行纯化；

向pH值为6.5-7的胶体金的溶液中加入卵白蛋白和封闭剂，得到胶体金标记的卵白蛋白，再通过差速离心对其进行纯化；

2）将纯化后的胶体金标记的狂犬病病毒抗原和胶体金标记的卵白蛋白涂布于金标结合区的聚酯膜上，并进行干燥，得到包被胶体金标记的狂犬病病毒抗原及卵白蛋白金颗粒的金标结合区；

3）分别用葡萄球菌白蛋白、卵白蛋白抗体在检测区的硝酸纤维素膜上划线，分别作为检测线与质控线，并进行孵育或干燥，制得检测区；

4）将所述金标结合区、检测区以及吸水区、加样区粘贴到PVC底板上。

本发明通过在检测线包被葡萄球菌白蛋白，质控线包被卵白蛋白抗体，在金标结合区包被胶体金标记的狂犬病病毒抗原及卵白蛋白金颗粒，从而有效降低对抗原蛋白的要求及用量，降低检测成本，并能提高检测灵敏度，避免假阳性，实现了狂犬病病毒抗体的人畜共检。另外，本发明质控线有效解决了多抗或单抗作为质控线的不稳定问题，对于大批量样品检测，野外应用及免疫后人群自检有重要意义，具有很大的市场发展潜力。

附图说明