[发明专利]反向调节烟草NtPSY基因功能的载体组合物有效
| 申请号： | 201310528496.5 | 申请日： | 2013-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN103555748A | 公开（公告）日： | 2014-02-05 |
| 发明（设计）人： | 雷波;丁福章;卢坤;赵会纳;任竹;蔡凯;潘文杰 | 申请（专利权）人： | 贵州省烟草科学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/66;C12N15/82 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 550081 *** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 反向 调节 烟草 ntpsy 基因 功能 载体 组合 | ||
1.一种载体组合物，其中至少一个载体含有SEQ ID NO.1所示的NtPIF1基因编码，至少另外一个载体含有SEQ ID NO.2所示的NtRAP2.2基因编码。
2.根据权利要求1所述的载体组合物，所述的NtPIF1和NtRAP2.2的基因编码分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列分别经过BamHI/XhoI和BamHI/SalI双酶切之后的片段。
3.根据权利要求1所述的载体组合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
利用表1中的引物NtPIF1-eF cgGGATCCATGAATCATTCAGTTCCTGATTTTGATATGGATG/NtPIF1-eR
cgCTCGAGCAATATGCAACAACTAGACTTTTCGATGGTG和NtRAP2.2-eF cgGGATCCATGTGCGGTGGTGCCATAATCTC/NtRAP2.2-eR
acgcGTCGACATAGACACCTCTCATTAGAGAAGAAAGTTC，扩增SEQ ID NO.1和SEQIDNO.2所示的NtPIF1和NtRAP2.2基因的编码区序列，扩增产物胶回收后以BamHI/XhoI和BamHI/SalI双酶切并再次胶回收；
带His标签的重组蛋白表达载体pET28a和GST标签的pGEX-4T1载体分别以BamHI/XhoI和BamHI/SalI双酶切，回收载体骨架；
分别将NtPIF1和NtRAP2.2表达片段连接至pET28a和pGEX-4T1载体，构建成pET-NtPIF1和pGEX-NtRAP2.2载体。
4.根据权利要求1所述的载体组合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
用表1中的引物NtPIF1-yF cgGAATTCATGAATCATTCAGTTCCTGATTTTGATATGGATG/NtPIF1-yR cgGGATCCCAATATGCAACAACTAGACTTTTCGATGGTG和NtRAP2.2-yF cgGAATTCATGTGCGGTGGTGCCATAATCTC/NtRAP2.2-yR
cgGGATCCATAGACACCTCTCATTAGAGAAGAAAGTTC扩增出SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示的NtPIF1和NtRAP2.2基因编码区，通过EcoRI和BamHI酶切连接到pGBKT7和pGADT7双元表达载体中，构建成激活域载体pGAD-NtPIF1和pGAD-NtRAP2.2，绑定域载体pGBK-NtPIF1和pGBK-NtRAP2.2，获得含有pGAD-NtPIF1与pGBK-NtRAP2.2及pGAD-NtRAP2.2和pGBK-NtPIF1质粒载体组合物。
5.根据权利要求1或2所述的载体组合物载体组合物在反向调节烟草中NtPSY基因的用途。
6.根据权利要求1或2所述的载体组合物载体组合物在调节烟草类胡萝卜素代谢合成中的应用。
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