[发明专利]一种定点突变改造的三磷酸胞苷合成酶有效
| 申请号： | 201310528691.8 | 申请日： | 2013-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN103540570A | 公开（公告）日： | 2014-01-29 |
| 发明（设计）人： | 应汉杰;朱梦珠;谢婧婧;孙梧进;王艳;郭亭;朱晨杰;陈勇;陈晓春;吴菁岚 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/00 | 分类号： | C12N9/00;C12N15/52;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/30;C12R1/15 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 210009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 定点 突变 改造 磷酸 合成 | ||
1.一种定点突变改造的三磷酸胞苷合成酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
2.根据权利要求1所述的定点突变改造的三磷酸胞苷合成酶，其特征在于，它是由氨基酸序列为SEQ ID NO：4所示的来源于谷氨酸棒杆菌ATCC13032的三磷酸胞苷合成酶进行定点突变改造得到，其第160位氨基酸由天冬氨酸突变成了谷氨酸，第162位氨基酸由谷氨酸突变成了丙氨酸，第168位氨基酸由谷氨酸突变成了赖氨酸。
3.编码权利要求1所述的定点突变改造的三磷酸胞苷合成酶的基因，其特征在于其核苷酸序列如SEQ ID No：1所示。
4.一种重组质粒，其包含了权利要求3所述的核苷酸序列。
5.一种重组细胞，其包含了权利要求4所述的重组质粒。
6.权利要求1所述的定点突变改造的三磷酸胞苷合成酶在合成三磷酸胞苷中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，用二甲苯处理过的菌体细胞1～2g加到10～15ml全细胞催化反应液中，全细胞催化反应液初始组分如下：以pH7.0～8.0100mmol/L Tris-HCl缓冲液为溶剂，添加15～30mmol/L谷氨酰胺、20～50mmol/L ATP、20～50mmo/L MgSO4、10～20mmol/L UTP，0.15～0.3mmol/L GTP。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，二甲苯的使用重量为菌体细胞重量的1～3%。
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