[发明专利]一种华重楼植株的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种快速获得华重楼组培苗的方法，特别是涉及一种华重楼植株的快速繁殖方法。

背景技术

中国药典规定的中药重楼为滇重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)和华重楼(Paris polyphylla var.chinensis)的地下茎，前者主产于云南，后者主产于四川。《神农本草经》最早记载的蚤休即华重楼。重楼具有清热解毒、消炎止痛、活血化淤、凉肝定惊的功效。

近年来因其发现具有抗病毒、抗肿瘤作用而需求量大增。从20世纪80年代以来，重楼已成为西部药用植物中最具代表性和全局影响力的药用植物资源之一。但重楼中药材历来主要以采收野生资源提供药用，由于长期对野生资源地过度采挖，也造成了目前华重楼植物资源几乎处于濒临灭绝的边缘。因而大力开发重楼植物资源具有十分重要的意义。

目前制约重楼植物规模化栽种的主要问题是重楼种苗的短缺。重楼种子由于存在种胚发育不完全，胚乳坚硬，胚轴后熟等明显“双重休眠”特性，因此播种后通常需要经历两冬一夏才能萌发成苗，是典型的“二年生种子”，而且在自然状态下，即使经过了长时间休眠，重楼种子的出苗率也不高，因此目前仅靠重楼种子进行有性繁殖已无法满足重楼植物大面积栽种的需要。

组培苗培养是现代生物技术的一项重要内容之一。它是在无菌培养条件下，以植物的离体器官、组织、细胞或原生质体作为外植体，在给予人工培养基和适宜的培养条件下培育出完整植株的过程。开展华重楼植物组培苗培养，可有效地解决其种子繁殖困难的问题。

目前还未见有在华重楼愈伤组织诱导的基础上,进一步获得华重楼组培苗的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种华重楼植株的快速繁殖方法，该方法培育的组培苗生长速度快、且保留了华重楼的优良特性。

本发明提供的华重楼植株的快速繁殖方法包括愈伤组织的诱导、不定芽的诱导和快速增殖、生根培养及炼苗和移栽步骤，

所述不定芽的诱导和快速增殖步骤是：将华重楼愈伤组织切成1～3cm³大小后接入MS＋6-BA 1.0～4.0mg·L^-1＋IAA 0.1～1.0mg·L^-1＋KT0.1～1.0mg·L^-1+头孢曲松钠200～500mg·L^-1的培养基中，在培养温度为4～8℃、每天光照8～12小时、光照强度为1000～1500lx的条件下进行培养；

所述生根培养步骤是：当不定芽长至1.2～3.0cm时，将不定芽连同其基部的愈伤组织一同切下并转接到生根培养基1/2MS＋IBA0.1～1.0mg·L^-1+NAA 0.1～0.5mg·L^-1+活性碳0.1～1.0%中，在培养温度为15～22℃、每天光照6～10小时、光照强度为500～1500lx的条件下进行培养；

所述炼苗和移栽步骤是：当组培苗长出第一片心形真叶且不定根生长2～4条以上时，打开瓶盖，直接将组培苗从培养瓶中取出，洗去其上的培养基后，先将其放入无菌水中栽培3～7天，然后再移栽至松软的土壤中生长。

所述愈伤组织的诱导可采用目前已公开的方法，如专利号为ZL201110211068.0的发明专利提供的以重楼根茎为外植体的愈伤组织培养方法、以及专利号为ZL201110210590.7的发明专利提供的以重楼芽鞘为外植体的愈伤组织培养方法。

愈伤组织的诱导也可以采用如下方法：取华重楼植物的根茎，先用流水洗净后吸干表面的水分，然后切除根茎上的不定根，再在超净工作台上切取带芽体的1～3个茎节，先用0.1%～0.2%升汞消毒6～12min，再用无菌水冲洗3～6次后切除其上的芽体，最后将上述根茎茎节切成0.5～1.5cm³大小后接入MS+6-BA 0.5～2.0mg·L^-1+NAA0.5～2.0mg·L^-1+2,4-D 1.0～3.0mg·L^-1的愈伤组织诱导培养基中，先置于4～10℃的冰箱中低温处理8～18天，再在培养温度为12～25℃、每天光照4～12小时、光照强度为800～1200lx的条件下进行培养。

进一步的，不定芽的诱导和快速增殖步骤中所采用的愈伤组织为质地紧密且颜色为黄白色或白色的愈伤组织。