[发明专利]一种制备高纯度他克莫司的工艺

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种用高压制备系统制备高纯度的他克莫司的工艺。 

背景技术

他克莫司（Tacrolimus）也译为他克雷姆，实验室命名为FK506，商品名为普乐可复，是从链霉菌属（streptomyces tsukubaensis）中分离出的发酵产物，其化学结构属23元大环内酯类抗生素。为一种强力的新型免疫抑制剂，主要通过抑制白介素-2（L-2）的释放，全面抑制T淋巴细胞的作用，较环孢素（CsA）强100倍。近年来，作为肝、肾移植的一线用药，已在日本、美国等14个国家上市。临床实验表明，其在心、肺、肠、骨髓等移植中作用应用有很好的疗效。同时FK506在治疗特应性皮炎（AD）、系统性红斑狼疮（SLE）、自身免疫性眼病等自身免疫性疾病中也发挥着积极的。 

目前，他克莫司主要是从发酵液中分离提取得到，如中国专利文献CN101712686A中公开的一种发酵液中他克莫司的分离纯化方法，具体公开了将链霉菌发酵液用板框压滤得到菌体，用有机溶剂多次室温浸提菌体，得到浸提液，将浸提液浓缩后进行大孔树脂和硅胶柱层析，柱层析所得他克莫司用混合溶剂进行浓缩结晶，得到的他克莫司晶体纯度达96.5%。由于在发酵过程中还产生了一些他克莫司异构体和类似物，如二氢他克莫司和子囊霉素等，使得分离纯化的他克莫司纯度不高，满足不了现有技术中对他克莫司纯度的要求，因此在现有技术中为提高他克莫司晶体的纯度，经发酵分离纯化后的他克莫司晶体还需要进一步的进行分离纯化步骤。 

中国专利文献CN101712685A公开的一种他克莫司粗品精制方法，具体公开了将经发酵分离纯化后获得的他克莫司粗品加入有机溶剂中溶解，用C₁₈反相制备液相色谱法实现他克莫司和二氢他克莫司、子囊霉素的分离纯化，最后获得的他克莫司晶体经HPLC检测纯度可达98.5%以上，提纯纯度大幅提高。但是，随着医药领域产业标准的不断提高，仅仅接近99%的纯度已无法 满足目前产业化要求，尤其是作为标准品的纯度要求。然而，现有技术中还没有更好的方法可以一次性仅仅通过制备步骤获得99%以上甚至99.5%以上的他克莫司产品。而且，就目前分离纯化工艺而言，不仅他克莫司的纯度有待提高，同时该工艺的产品收率也并不理想。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是现有技术中的他克莫司的纯度仍然存在的不足，进而提供一种用高压制备系统制备高纯度他克莫司的工艺进一步提高他克莫司的纯度和收率。 

为解决上述技术问题，本发明提供了一种用高压制备系统制备高纯度他克莫司的工艺，包括如下步骤： 

（1）取干燥的他克莫司粗品晶体1～2重量份加入7～9体积份的四氢呋喃中，加热直至溶解，加水得到他克莫司浓度为45～55mg/ml的样品溶液，精密过滤得到所需的进样溶液； 

（2）采用高压液相色谱分离所述进样溶液的他克莫司，所述色谱条件为： 

色谱柱：C₁₈反相色谱柱， 

柱高为15～40cm，直径为15～50cm；径高比为1:0.8～1:4； 

流动相组成体积比为四氢呋喃：乙腈：水：乙酸=3～5:0.5～1.5:6～8:0.01～0.05； 

运行温度为20℃～50℃； 

流速为1L/min～5L/min； 

检测波长为220nm； 

收集出峰时间为19～24min下的流出液，并合并HPLC检测后单个杂质含量低于0.1%部分的他克莫司流出液； 

（3）蒸发浓缩：将收集的所述流出液于60～70℃蒸发，析出他克莫司后过滤，将滤出的他克莫司加无水乙醇溶解，并精密过滤后浓缩至干品； 

（4）结晶：取浓缩后的他克莫司干品加入1～4体积份的无水乙醇中加 热至溶解，滴加纯水至微浑浊且静置不澄清，返滴加无水乙醇至刚刚澄清即停止，加入他克莫司晶种，搅拌冷却，静置6～10h，3～5℃冷藏10～14h，至结晶完全； 

（5）干燥：取析出的所述他克莫司晶体加入55～65%的乙醇洗涤、抽滤，真空除去洗涤液，然后再将洗涤液与晶体混合，重复洗涤2～3次，抽干洗涤液，得到的晶体真空38～42℃干燥21～24h，即得； 

所述重量份与所述体积份的关系为g/ml的关系。 

上述述制备高纯度他克莫司的工艺，包括如下步骤：