[发明专利]一种剑叶龙血树的组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种剑叶龙血树的组织培养快速繁殖方法。

背景技术

剑叶龙血树又名千年木、血竭树、交趾龙血树，是渐危种，属国家二级保护植物，2003年被国际自然与自然资源保护联合会划归为易受危害的物种列为红色名单，被定为佛得角红皮书中的濒危物种，是目前国内公认的国产龙血竭的基源植物。

血竭是一种名贵传统中药，在我国的使用历史已有1500年以上。据《本草纲目》记载，龙血竭性温、平，味甘、咸，无毒，入血分，归肺、脾、肾三经，具有活血化瘀、消肿止痛、收敛止血，软坚散结、生肌敛疮等显著功效，被誉为活血圣药。现代医学研究证实，血竭具有改善机体微循环、调整机体新陈代谢、改善机体免疫功能等作用。

虽然血竭在国内的使用历史悠久，但在1972年以前一直是依靠东南亚和非洲进口，价格十分昂贵。1973年蔡希陶先生在云南思茅地区孟连县境内的石灰山上发现了大片可以产生血竭的龙血树，才暂时缓解了我国血竭的资源压力，从而诞生了国产龙血竭的历史。但是龙血树的生长非常缓慢，一年之内树干增粗还不到1厘米，龙血竭又为龙血树受伤后流出的红色液体，产量非常有限。而且随着医药观念的转变，越来越多的人群倾向于使用传统中医药来防病治病，中药资源的用量急剧上升，越来越多的药用植物趋于稀缺，甚至濒危。近年来，市场对龙血竭需求的不断扩大，目前龙血竭价格已涨到1000-1300元/kg，致使人们对剑叶龙血树野生资源实施了不合理的掠夺性采伐，剑叶龙血树野生资源日趋枯竭，濒危灭绝，已经被国际上很多国家列为珍稀濒危保护植物。

为了加强龙血竭基源植物保护，防止剑叶龙血树的濒危灭绝，实现资源的可持续利用，需要大力推广剑叶龙血树的栽培种植。在种苗繁育上，剑叶龙血树可通过种子、扦插或分蘖繁殖，但这种常规方法的繁殖速率低，所需时间长，所得的种苗数量非常有限，生产上难以实现大面积栽培。而采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高剑叶龙血树种苗的繁殖速度和质量，实现剑叶龙血树优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。

发明内容

本发明的目的是提供一种剑叶龙血树的组织培养快速繁殖方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良剑叶龙血树种苗、满足生产需要。

本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种剑叶龙血树的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

（1）外植体的选择与消毒：取剑叶龙血树种子作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；

（2）种子萌发获得无菌试管苗：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中含1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

（3）试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤（2）中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中含1.0-5.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-2.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

（4）丛生芽壮苗培养：将步骤（3）中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养20天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中含1.0-3.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.5-1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

（5）健壮植株生根培养：将步骤（4）中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为12-14小时/天的条件下培养35天得到带根的完整植株，其中MS生根培养基中含0.1-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；