[发明专利]一种高产酸性多糖的虫草菌丝体的培养方法及酸性多糖

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种高产酸性多糖的虫草菌丝体的培养方法及酸性多糖。

背景技术

冬虫夏草(Cordyceps)，又名虫草、冬虫草、夏草冬虫。属于真菌界，真菌门，子囊菌纲，肉座菌目，麦角菌科，虫草属。主要分布在我国青海、西藏、四川、云南、贵州、甘肃海拔4000米左右的高海拔地区。天然虫草生长环境特殊，价格较高，人们已用生物发酵技术培养虫草菌丝体来替代冬虫夏草。其成分、药用价值与冬虫夏草类似，具有抗炎，抗氧化，抗流感病毒，免疫调节，降血糖，抗肿瘤和抗血管生成等活性，是冬虫夏草的理想代用品，菌丝体中的虫草多糖药用价值很高，主要由甘露糖，葡萄糖和半乳糖组成。

现研究的酸性多糖(如含有糖醛酸和/或硫酸根)的活性有很多，其中抗血管生成活性与酸性多糖中的糖醛酸和硫酸根有关。现有技术中已经报道如果将岩藻糖过硫酸化，可以增加岩藻糖本身的抗血管及抗肿瘤的能力。众所周知，若没有血液供应，肿瘤细胞由于缺血缺氧会发生死亡，肿瘤尺寸不会超过2-3mm³。在化疗间期肿瘤细胞加速再增殖过程中，若给予抗血管生成治疗可抑制残存肿瘤细胞的再增殖，可达到提高化疗药物治疗效果，延缓疾病进展的目的。

目前，多数的报道集中在虫草多糖的提取方法，虫草的培养条件，通过改变培养条件，提高虫草中的某一种活性成分如虫草多糖、虫草素等的含量。如专利CN201210353679公开了一种从蛹虫草提取虫草素和多糖的方法。专利CN200910093938公开了一种蛹虫草菌种的培养方法。专利CN201110184265公开了一种以青稞为主要原料培养蛹虫草的方法，使蛹虫草的有效成分虫草素的含量由现有的0.5％提高到1％，虫草酸含量由现有的6.1％提高到9％，虫草多糖含量由现有的7.4％提高到10.5％，蛹虫草的有效成分含量总提高200-250％。只有少数报道中提到糖醛酸的存在，目前没有关于虫草中硫酸多糖存在的报道。用现有的培养方法培养的菌丝体，其虫草多糖的抗血管活性并不理想。

发明内容

本发明涉及一种高产酸性多糖的虫草菌丝体的培养方法，培养出的虫草菌丝体产品中含有较高浓度的酸性多糖，与普通培养基培养的多糖相比糖醛酸含量提高了0.12-2.99倍，硫酸根含量提高了0.44-9.19倍。该酸性多糖的抗血管生成活性比普通培养方法得到的多糖活性提高了0.1-4倍，并且培养温度易达到，培养原料来源丰富，培养成本低，适合任何虫草菌丝体，具有较高的应用价值和较好的市场前景。

实现上述发明目的的技术方法是：

1.一种培养高产酸性多糖的虫草菌丝体的方法，具体包括如下步骤：

(1)菌株扩增：采用固体培养基将菌株扩增；

(2)种子液培养：从固体培养基上挑取菌丝体于液体培养基中培养；

(3)发酵培养：取种子液于液体养基中(含0.03-1230ug/mL盐)，在15℃-28℃条件下，培养10-14天；

所述的盐包括MgCl₂、MnCl₂、KCl、NaCl、Na₂SO₄、K₂SO₄、MgSO₄、MnSO₄中的一种或几种的混合物。

2.进一步地，步骤(3)中盐的含量为170-610ug/mL，培养温度为16℃-23℃或25℃-28℃。

3.更进一步地步骤(3)中盐的含量为210-500ug/mL，培养温度为27℃或19℃。

4.以该方法培养出的菌丝体，其中的酸性多糖，其特征在于，酸性多糖中包含中性糖，氨基糖和糖醛酸，总多糖的含量不少于85％，糖醛酸占总糖的质量百分比为4.68-16.8％，硫酸根占总糖的质量百分比为1.56-11％，多糖的重均分子量为30KD-6000KD，其中50KD以下的多糖含量不少于60％；

所述的中性糖包含甘露糖，葡萄糖，半乳糖，木糖，鼠李糖和阿拉伯糖；

所述的氨基糖包含葡萄糖胺；

所述的糖醛酸包含葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸。

与现有技术相比，本发明具有以下有益技术效果：

(1)本发明涉及的培养虫草菌丝体的培养方法，发酵温度接近室温，容易达到，培养原料来源丰富，培养成本低，易于大规模培养，具有较大的经济价值。