[发明专利]水样中关键拟/抗雄激素干扰毒物快速鉴别方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种不同污染程度水体拟/抗雄激素干扰毒物快速鉴别的前处理与测定方法，更具体地说，是一种结合了化学分析与毒性当量计算的方法，即针对含有常见拟/抗雄激素干扰活性物质的复杂环境水样同柱萃取污染物再基于质量平衡数据库，利用建立的毒性当量计算方法与GC-MSMS的SRM扫描模式进行毒物筛查的快速毒性来源的鉴别方法。

背景技术

随着经济的发展和人们生活水平的不断提高，在工、农业生产及生活、消费过程中，大量的有机污染物被不断排放到水体环境中，造成环境有机污染日趋严重。这些有机污染物中的很多种类都被证明具有内分泌干扰活性，特别是雄激素干扰效应，称为环境雄激素干扰毒物，过去对环境雄激素干扰毒物的监测多采用将化学分析和毒性鉴定手段结合起来的方法，即在毒性测试的基础上用化学分析的方法对有毒组分中的主要物质进行定性分析，该方法仅基于分级分离技术，由于缺乏对雄激素干扰效应潜在致毒物质的了解，不能进行质量平衡分析，只能靠穷尽法将有机提取物分为更多组分，以达到定性识别的目的，样品甚至需被分为近百组分，因此该过程需要大量环境样品，特别是对于污染程度不高的水环境样品的需求量甚至可以达到100L，造成实验步骤繁琐，相关毒物定性鉴别不确定性高，工作难度大。

《Environmental Science&Technology》2009年第43期上8066页公开了一篇有关北海近海岸带地区水样有机提取物中的雄激素活性物质鉴别的文章《Effect-Directed Identification of Naphthenic Acids As Important in Vitro Xeno-Estrogens and Anti-Androgens in North Sea Offshore Produced Water Discharges》，其中叙述的方法是用C18的固相萃取柱富集水中的有机污染物，然后利用正己烷进行洗脱，再利用高效液相色谱分离富集液为31个组分，对不同的组分进行毒性测试，对有毒性效应的组分进行定性分析，研究发现烷基酚是抗雄激素活性的主要来源，但定性出来的物质对总毒性的毒性贡献率不足一半。该方法相对于以前的方法进步不少，可以同时提取水中的有机物并做到雄激素活性鉴定及毒物追踪，但该方法使用单一的正己烷作为固相萃取柱的洗脱溶剂使得实验对于极性物质的回收率低，且其运用C18作为填料对于极性物质的富集性能差，特别是该方法利用高效液相色谱将提取液分为31个组分，所需水量大，耗时久，只能用于高污染水体的分析，无法应用于人们日益关注的低污染水体中有机物的提取及毒物的快速鉴别，且鉴别出的物质对于总毒性贡献较小，不是主要致毒物质。

通过检索发现国内外文献没有结合毒性测试与化学分析，利用雄激素干扰物质量平衡数据库进行内分泌干扰毒物鉴别的方法报道。

发明内容

1.要解决的问题

针对现有环境水体中关键雄激素干扰物鉴别困难、成本高的问题，本发明提供一种水样中关键拟/抗雄激素干扰毒物快速鉴别方法，可用于环境水样中内分泌干扰毒物鉴定与毒性来源分析。

2.技术方案

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种水样中关键拟/抗雄激素干扰毒物快速鉴别方法，其步骤为：

（1）取待测水样，水样通过滤膜过滤后，通过固相萃取柱进行富集，萃取完毕后，萃取柱负压真空干燥；

（2）使用有机溶剂洗脱步骤（1）中的萃取柱，将洗脱液浓缩，然后用有机溶剂定容，取其中一部分洗脱液，将其中的溶剂替换为二甲基亚砜用于拟/抗雄激素活性总毒性测试，建立公式（1）：

TEQ即环境样品毒性当量计算法计算的总毒性当量，对于有毒性效应的点位即与对照毒性效应具有显著性差异的点位（p<0.01），另取一部分富集液用于后续的关键毒物鉴别，其中EC₅₀为半最大效应浓度；

（3）整理公开资料中的常见拟雄激素活性物质与常见抗雄激素活性物质，建立的标准物质毒性当量计算公式（2）：

化合物的REP表示对应的毒性当量，计算各雄激素毒物毒性当量；利用GC-MSMS逐一测定其特征离子，建立质谱特征数据库；结合化合物的毒性当量与质谱特征数据库，建立毒物质量平衡数据库；