[发明专利]一种注射用二丁酰环磷腺苷钙的含量检测方法

说明书

技术领域

本发明方法属于分析化学领域，尤其涉及二丁酰环磷腺苷钙的检测领域，具体涉及一种注射用二丁酰环磷腺苷钙的含量检测方法。 

背景技术

二丁酰环磷腺苷钙是一种新型的核苷酸类衍生物，为化学合成的环磷腺苷的衍生物，属蛋白激酶激活剂。二丁酰环磷腺苷钙对细胞的渗透性比环磷腺苷强，且能对抗体内磷酸二酯酶的降解作用，起效快，作用时间长，对改善心肌缺氧、扩张冠脉、增强心肌收缩力、增加心排血量等效果显著。目前，注射用二丁酰环磷腺苷钙含量测定通常用纸色谱法，但纸色谱法灵敏低、定量测定困难、操作复杂，给注射用二丁酰环磷腺苷钙的大规模、批量化检测造成一定困难。 

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种注射用二丁酰环磷腺苷钙的含量检测方法，其定量测定准确度高，并且检测操作简单方便。 

一种注射用二丁酰环磷腺苷钙的含量检测方法，其特征在于：采用高效液相色谱法对待测注射用二丁酰环磷腺苷钙进行分析检测，色谱条件为： 

（1）二丁酰环磷腺苷钙的对照品溶液和待测注射用二丁酰环磷腺苷钙的供试品溶液浓度为0.05~1.2mg/ml，进样量为20ul；

（2）色谱柱以C₂~C₁₈烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

（3）紫外检测波长为250nm~300nm；

（4）流动相由含离子对试剂的无机盐溶液与甲醇或乙腈组成，离子对试剂浓度为0.01~1.5mmol/L、所述无机盐浓度为0.01~0.2mol/L，所述离子对试剂选自四丁基氢氧化铵、四甲基氢氧化铵、四丁基溴化铵、十二烷基三甲基氯化铵，所述无机盐选自钾或钠的磷酸盐、碳酸盐、枸橼酸盐、C₂-C₆羧酸盐、马来酸盐和富马酸盐，无机盐溶液与甲醇或乙腈的体积比为99：1~20:80。

其进一步特征在于： 

待测注射用二丁酰环磷腺苷钙的供试品溶液的溶剂选自水、甲醇、乙腈、四氢呋喃或流动相；

所述无机盐溶液含离子对试剂0.5~1.2mmol/L、无机盐0.05~0.15mol/L，所述无机盐溶液与甲醇或乙腈的体积比为70:30~50:50；

所述无机盐选自磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、枸橼酸钠、乙酸钠和马来酸钠；

所述紫外检测波长为268nm~278nm。

其更进一步特征在于： 

所述待测注射用二丁酰环磷腺苷钙的供试品溶液浓度为0.5mg/ml，溶剂选自水；

所述无机盐溶液含离子对试剂1mmol/L、无机盐0.1mol/L，所述无机盐溶液与甲醇或乙腈的体积比为60:40；

所述离子对试剂优选四甲基氢氧化铵，所述无机盐优选磷酸二氢钾；

所述紫外检测波长优选273nm；

所述填充剂优选C₁₈烷基硅烷键合硅胶。

与现有技术相比，一方面，本发明的检测方法重复性好，准确性高，线性良好，可操作性强；另一方面，本发明避免了复杂的检测操作，大大提高了检测效率，适用于注射用二丁酰环磷腺苷钙的大规模、批量化生产过程中的产品质量的快速检测。 

附图说明                                                    

图1为二丁酰环磷腺苷钙对照品HPLC色谱图。

图2为注射用二丁酰环磷腺苷钙HPLC色谱图。 

具体实施方式

实施例1 

色谱条件：高效液相色谱仪（岛津LC-15），十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（250mm*4.6mm，5μm ，Kromsil），流动相为含0.1mol/L磷酸二氢钾、1mmol/L四丁基氢氧化铵的无机盐溶液—甲醇（60：40），检测波长273nm，柱温25℃，进样量20μL。

实验步骤：（1）进样溶液制备：精密称取二丁酰环磷腺苷钙对照品10.28mg，置20ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；精密称取注射用二丁酰环磷腺苷钙（为自制的无菌冻干粉针，后同）10.00mg，置20ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。（2）取对照品溶液和供试品溶液进样，照上述的检测条件进行高效液相分析。二丁酰环磷腺苷钙对照品HPLC色谱图如图1所示，注射用二丁酰环磷腺苷钙HPLC色谱图如图2所示。