[发明专利]鸭圆环病毒基因组中ＤＮＡ的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种实验方法，具体来说是指鸭圆环病毒基因组中ＤＮＡ的提取方法。 

背景技术

DuCV 属于圆环病毒科、圆环病毒属，无囊膜，单股环型 DNA 结构，二十面体对称。其在电镜下的大小与其他圆环病毒类似，直径为15到16nm。由于目前尚不能进行分离培养，所以对于其病原学特征的研究相当有限。圆环病毒的共同特征是引起宿主的免疫抑制而导致继发感染或二重及多重感染，特别是鸡传染性贫血病病毒（CIAV）和猪圆环病毒 2 型（PCV2）近年来给世界养殖业造成了巨大的经济损失，从而引起全世界对圆环病毒的高度关注。鸟类圆环病毒的感染以生长发育迟缓、体重减轻、羽毛凌乱等临床症状为共同特征（Todd et al.,2000）。已有的研究表明BFDV 常常导致鹦鹉羽毛营养严重失调（Latimer et al.,1991）；鸽子感染圆环病毒导致法氏囊淋巴组织坏死、组织细胞增多，肝脏中胆囊充血堵塞，腹部变大（Pare et al.,1999; Soike et al., 1997; Woods et al., 1994 ）；金丝25雀的雏鸟常常因感染圆环病毒而导致死亡（Todd et al.,2001），来自鹅的圆环病毒引起的矮小综合征也被报道（Soike et al.,1999）。圆环病毒感染造成的淋巴组织损伤导致了机体体液免疫和细胞免疫功能的下降，这种免疫抑制反应增强了其他共感染因素的致病性。 

发明内容

为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案： 

鸭圆环病毒基因组中ＤＮＡ的提取方法，首先，将事先已经做好准备的鸭圆环病毒保存于低温冰箱中，至少２４小时；然后取出，用无菌缓冲液对其进行稀释，稀释后体积为原来的至少５倍；稀释后将其投入冰浴至少十分钟；高速离心，室温下；然后加入胶原蛋白酶；混合均匀、振荡；热浴；取其上清液，加入等体积氯仿；摇匀；加入二分之一重量的饱和苯酚以及醋酸钠；混合均匀；高温曲菌；与零下七十度冷藏十分钟后取出即可。

本发明中，所述缓冲液为无菌ＰＢS，且其PH值不应该大于8，碱性。 

本发明中，低温冷藏后应该倒掉上清。  

本发明的有益效果是，成功提取了鸭圆环病毒基因组中ＤＮＡ，纯度很高，操作便捷，成本较低，反复性强，复合实验标准。

具体实施方式

鸭圆环病毒基因组中ＤＮＡ的提取方法，首先，将事先已经做好准备的鸭圆环病毒保存于低温冰箱中，至少２４小时；然后取出，用无菌缓冲液对其进行稀释，稀释后体积为原来的至少５倍；稀释后将其投入冰浴至少十分钟；高速离心，室温下；然后加入胶原蛋白酶；混合均匀、振荡；热浴；取其上清液，加入等体积氯仿；摇匀；加入二分之一重量的饱和苯酚以及醋酸钠；混合均匀；高温曲菌；与零下七十度冷藏十分钟后取出即可。所述缓冲液为无菌ＰＢS，且其PH值不应该大于8，碱性；低温冷藏后应该倒掉上清。  

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。