[发明专利]一种酒神菊属型蜂胶质量控制的方法及应用

说明书

技术领域

本发明属蜂产品领域，涉及一种酒神菊属型蜂胶质量控制的方法。

背景技术

蜂胶具有广泛的生物学活性，主要有抑菌、抗真菌、抗原生动物、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、抗癌和抗氧化活性。蜂胶已广泛用于保健食品，饮料及药品。

巴西地处南美亚马逊流域，拥有世界最大的原始森林，植物种类冠于全球，被誉为世界的“植物宝库”。巴西不同地理来源的蜂胶化学成分及药理活性差异较大。目前研究表明，根据地理来源，化学组成及植物源可将巴西境内的蜂胶分为13个类型，其中巴西东南部的绿蜂胶是研究最多的，已出口至中国十余年，目前巴西绿蜂胶的主要进口国为日本，其次是中国。根据巴西发展工业部和对外贸易部的统计，2010年，巴西出口蜂胶51,213 Kg，产值$4,346,604，即84.87 $/Kg；2011年，巴西出口蜂胶38,845 Kg，产值$4,537,727，即116.81 $/Kg；2012年，巴西出口蜂胶41,721 Kg，产值$5,401,643，即129.47 $/Kg。从这些数据可以看出，与2010年相比，尽管蜂胶年出口量有所降低，但蜂胶的总产值及单产值均明显增加，其中2012年的总产值比2010年增加了50%以上。日本和中国进口的巴西蜂胶主要是酒神菊属型蜂胶，其价格也是逐增加，巴西酒神菊属型蜂胶的原料价格已达中国杨树型蜂胶原料价的十倍之多，而巴西蜂胶种类较多，如何保证巴西酒神菊属型蜂胶的真实性显得尤其重要。

巴西酒神菊属型蜂胶的植物来源是Baccharisdracunculifolia DC.，其主要成分为异戊烯苯丙类和p-香豆酸的异戊烯基衍生物，然而其总黄酮含量较低。由于缺少质量控制相关的指标，巴西蜂胶销售企业只能参照中国蜂胶的国家标准制定相应的企业标准。而中国蜂胶主要是杨属型蜂胶，其活性成分主要是类黄酮类化合物，以总黄酮含量高为特色。因此，参照中国的蜂胶国家标准难以体现巴西酒神菊属型蜂胶的生物活性，甚至出现以杨属型蜂胶乃至杨树胶冒充巴西酒神菊属型蜂胶的不法现象。建立巴西酒神菊属型蜂胶的真实性评价方法，将有利于进口和销售巴西酒神菊属型蜂胶的企业利益及消费者的合法权益。

发明内容

本发明目的是提供一种酒神菊属型蜂胶质量控制的方法，是一种用高效液相色谱方法检测蜂胶中绿原酸、p-香豆酸、咖啡酸、芦丁和Artepillin C的方法，真正解决酒神菊属型蜂胶真实性鉴别及质量控制中的重要的技术难题。该方法鉴别酒神菊属型蜂胶的真实性具有准确度高，灵敏度强、相对时间短以及成本低等优点。

本发明的目的是通过以下方案实现：

（1）分别称取绿原酸、p-香豆酸、咖啡酸、芦丁和阿替匹林（Artepillin）C对照品10、10、10、40、10 mg，用甲醇定容为10 mL，然后分别取0.5、0.2、0.5、0.25、4 mL用甲醇定容为10 mL作为标准混合液，经微孔膜过滤后，用高效液相色谱（HPLC）分析；

（2）取一定量的待测样品进行冷冻粉碎混匀，取0.25g，用体积比85%的乙醇超声提取，料液比1∶15-45，超声15-45 min，提取2-4次，用相同浓度乙醇定容，经微孔膜过滤后，用高效液相色谱测定方法进行测定；

（3）将待测样品色谱图（步骤2）与绿原酸、p-香豆酸、咖啡酸、芦丁和Artepillin C混合标准品色谱图（步骤1）对比，在待测样品中检测到绿原酸、p-香豆酸、咖啡酸、Artepillin C的特征峰，则为酒神菊属型蜂胶；在待测样品中检测到绿原酸、p-香豆酸、咖啡酸、Artepillin C和芦丁色谱峰，则为添加了芦丁的酒神菊属型蜂胶样品；在待测样品中检测不到绿原酸和Artepillin C色谱峰，则为非酒神菊属型蜂胶。

本发明所述的高效液相色谱仪（HPLC）的分析条件为：Sepax C18 (150 mm×4.6 mm, 5μm)；流速1 mL/min；检测波长280-360 nm；柱温28-35℃；进样量：2μL。

本发明所述的流动相为：纯甲醇和体积比为1%的乙酸水混合液按体积比二元梯度洗脱，洗脱程序为：0-10 min，甲醇15-25%；10-25 min，甲醇25-40%；25-55 min，甲醇40-60%；55-75 min，甲醇60-80%；75-90 min，甲醇80%。

本发明的另一个目的是提供所述方法在酒神菊属型蜂胶质量控制中的应用。