[发明专利]一种生产富含苯乳酸凝结芽孢杆菌固态发酵饲料及其制备

说明书

技术领域

本发明属于生物制剂领域，是一种利用固态发酵凝结芽孢杆菌提高苯乳酸的产量，从而获取富含苯乳酸的固态发酵饲料，获取具有更高应用价值的固态制剂的制备方法。 

背景技术

微生态制剂又称活菌制剂或生菌剂，主要是用于调节动物机体微生态平衡,具有直接通过增强动物对肠内有害微生物的抑制作用或通过增强非特异性免疫功能来预防疾病，从而促进动物生长或提高饲料转化率的一类药物或饲料添加剂。微生态制剂具有无毒副作用、无耐药性、无残留、成本低、效果显著、不污染环境等特点，可以促进动物胃肠道正常微生物区系的建立，阻碍有害物质及废物的吸收，改善畜产品的质量等，克服了抗生素所产生的菌群失调、二重感染和耐药性等缺点，具有显著的经济效益和社会效益。 

凝结芽孢杆菌是被美国，欧盟，日本批准做为饲料添加剂使用的微生物。它具有调节肠道功能紊乱，增加动物消化功能，维持肠道内菌群平衡和提高机体健康水平以及生产性能，提高动物免疫力等功能。另外，芽孢的产生还使凝结芽孢杆菌具有耐酸碱，耐高温抗逆性强这些优点，从而凝结芽孢杆菌能很好的适应培养环境，容易培养。 

凝结芽孢杆菌主要以两种方式来影响机体的消化作用：一是促进产生多种消化酶的分泌,提高对营养物质的消化与吸收；二是通过该菌种在动物消化道内生长、繁殖和定植，直接产生如维生素、氨基酸、短链脂肪酸等多种营养物质，并明显增加小肠蠕动的速度，改善肠道消化功能，促进对饲料中各种营养成分的消化与吸收。 

苯乳酸最早发现存在蜂蜜里面，最近发现一些微生物例如大部分的乳酸菌，芽孢杆菌属等也能产生苯乳酸。作为一种防腐剂，苯乳酸具有广谱抑菌活性：能够抑制许多细菌例如李斯特菌属，葡萄球菌，大肠杆菌，沙门氏菌和许多真菌包括酵母,许多的霉菌（娄地青霉，桔青霉）；苯乳酸已经用在了饲料中，它对母鸡的免疫系统产生一些积极的影响，最终有效提高产蛋量和蛋的质量。苯乳酸添加在鸡的饲料中时，能够提高产量，在肠道内产生抗病原体的活性，降低肉质发黄；苯乳酸在刚断奶的和增长的猪体内能够提高与免疫有关的血细胞的数量，降低大肠杆菌的数量。 

发明内容

本发明提供了一种固态发酵凝结芽孢杆菌提高苯乳酸产量，从而获取富含苯乳酸的固态发 酵饲料的一种方法。 

本发明实现目的的技术方案如下： 

凝结芽孢杆菌液体种子接入固态培养基中进行固态发酵培养，固态培养基的基本成分为豆粕，米糠，麦芽浸粉和水分组成，所述固态培养基中加入苯丙酮酸或者苯丙氨酸，来提高苯乳酸的产量；固态发酵55-65h，发酵温度为33-38℃，发酵室内的相对湿度控制在75-80%，发酵期间每隔12h翻匀一次。固态发酵培养后获得固态发酵饲料。 

固态培养基组分为水分，豆粕，米糠，麦芽浸粉；所述固态培养基中各组分的的添加量如下：水分，豆粕，米糠，麦芽浸粉分别为500-700g/kg，200-250g/kg,50-100g/kg,20-50g/kg。 

固态发酵培养基接种量范围为5-15%，接种量为10%时苯乳酸产量最大。苯丙酮酸的添加浓度为2-3g/kg；苯丙氨酸的添加量为2.5-3.5g/kg时； 

苯丙酮酸的最适添加浓度为2.7g/kg，苯乳酸产量最大为815mg/kg，此时的转化率为98.7%； 

苯丙氨酸的添加量为3g/kg时，苯乳酸产量为752mg/kg,此时转化率为94.9%。 

优选的固态培养基组分和添加量如下：水分的添加量为600g/kg。豆粕225g/kg，米糠75g/kg时，麦芽浸粉30g/kg。 

本发明所述凝结芽孢杆菌的名称为TQ33，分类名称Bacillus coagulans，保藏编号为：CGMCC No.5233保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。 

所述凝结芽孢杆菌的种子液培养基的组成（g/L）：蛋白胨20.0、酵母膏10.0、葡萄糖20.0，初始pH7.2-7.4。 

种子液的培养条件：温度37±1℃，转速为200r.min^-1，培养时间18h。 

本发明使用生理盐水(超纯水配制)提取苯乳酸，将固态发酵样品和超纯水以1:4的比例混合，在4℃冰箱里放置4h后提取上清液，离心过膜后，利用高效液相测量苯乳酸的含量。 

本发明所用的HPLC的条件