[发明专利]诱导子在西洋参发状根中的应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种诱导子在西洋参发状根中的应用方法，属于作物生物技术领域。

背景技术

西洋参又称美国人参，原产于美国东部和加拿大，是五加科人参属植物，为名贵药材，多年生草本植物，70年代在我国引种成功。现代化学和药理学研究表明，西洋参具有提高免疫力、强心、健胃、降血脂、镇静、造血和抑制肿瘤等医疗作用，其某些药理作用是人参无法代替的。西洋参主要有效成分是次生代谢产物-人参皂苷，目前尚未人工合成。

西洋参虽早在70年代就在我国成功引种，但生长期较长，且受病虫害、气候、环境及栽培技术等多方面的限制，故产品远不能满足市场所需，且价格昂贵。因此利用现代细胞工程技术对西洋参进行细胞和组织培养已成为解决这一问题的突破点。许多科研工作者正从事这一热点问题的研究并取得了一定的进展：第一，快速大量繁殖西洋参种苗及改良、培育新品种，以满足生产需要；第二，大量培养西洋参细胞并从中提取人参皂苷，同时通过优化培养条件提高人参皂苷的含量，从而使人参皂苷的生产摆脱自然环境条件的限制而实现次级代谢物的工业生产；第三，利用基因工程技术建立转基因器官，人工设计新性状，加速细胞繁殖速度，提高皂苷的含量。

人参皂苷作为西洋参中的一类极为重要的有效成分，其产量很低，加之近年来，生态环境的人为破坏，以及西洋参栽培技中老龄土问题的存在，导致可种参的土地面积急剧缩小，使西洋参市场呈现供不应求的状态，为了解决这一问题，满足人们的需求，人们开始尝试用各种途径提高西洋参次生代谢产物的产量，如组织培养、发状根的诱导、前体饲喂、诱导子的添加等。

目前，西洋参发状根诱导子的添加报道甚少，水杨酸、茉莉酸甲酯在西洋参发状根中的诱导尚未报到，两种诱导子的协同作用也没有报道。

发明内容

本发明的目的在于克服上述技术的缺陷，提供一种水杨酸、茉莉酸甲酯两种诱导子对西洋参代谢的影响研究及应用方法，以期提高皂苷产量，为西洋参皂苷的大规模培养提供依据，实现西洋参皂苷的工业化生产，满足人们日益增长的需求。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下。

诱导子在西洋参发状根中的应用方法，其过程包括以下步骤：

(1)西洋参发状根的诱导：

(1a)外植体处理：(I)西洋参种子萌发及处理：经过沙藏层积处理，已经开裂的种子，播种到栽培盘中，遮荫培养，待播种1～2周苗长出后，用0.1％升汞消毒6min，无菌水清洗5次，将其叶片、带叶幼茎和茎段切成1.0cm的切段，接于MS固体培养基上预培养用作转化的起始材料。(II)西洋参三年生根的处理：将西洋参三年生根表面用清水清洗干净后，流水冲洗3～4h，用0.1％升汞消毒10min后，无菌水洗5遍，切成0.2cm厚的薄片放在MS固体培养基上待用。

(1b)菌种保存、活化及培养：发根农杆菌的长期保存方法是将农杆菌溶于甘油中，于一20℃条件下保存，这种方法可以保存菌种几年。短期保存的方法是将发根农杆菌接种于YEB固体培养基上培养，当长出菌斑后，于4℃冰箱中保存，此种方法可以保存菌种数月。无菌条件下，接种针挑取保存菌液，于相应的平板上划线培养，28℃置于黑暗条件下培养，直到长出单菌落。挑取一个单菌落接种于50ml液体YEB培养基中，120r／min、28℃、暗条件下培养24h，此时YEB液体培养基由接种前的透明的红棕色变成浑浊的淡黄色，证明细菌已正常长出。取1ml已活化的菌液加入50ml的YEB液体培养基中，120r／min，28℃暗条件下培养，活化菌液达到生长对数期，此时菌液就可以作为感染用。