[发明专利]转化大豆的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物转化的方法，特别是涉及一种转化大豆组织的方法。

背景技术

大豆（Glycine max）起源于中国，是植物蛋白质的主要来源，也是中国重要的油料作物和高蛋白粮饲兼用作物，种植面积仅次于水稻、玉米和小麦，居第四位。为了提高大豆耐除草剂、抗病虫害及生理逆境的能力、改善大豆品质、增加大豆产量，除了采用传统的育种方法外，可通过基因工程手段实现有目的的遗传工程改良。

大豆的遗传转化方法主要有农杆菌介导法、基因枪轰击法、电击法、PEG法、显微注射法、超声波辅助法和花粉管导入法等，其中农杆菌介导法为大豆常用的转基因方法。而农杆菌介导法不仅受到植物基因型依赖和菌株特异性的限制，不同的大豆受体系统也是大豆遗传转化的重要环节，目前常用的大豆受体系统主要有：

（1）子叶节受体系统：大豆转化过程中运用最早最普遍的就是子叶节受体系统（Hinchee et al.,1988）。该系统是将发芽5天左右的大豆在下胚轴离子叶3-5mm处横切，然后将两片子叶纵切开，去掉上胚轴部分。这种受体系统的特点是：没有经过愈伤组织阶段直接分化成不定芽；得到再生苗时间短，一般3个月就可得到生根的植株；再生频率高等。由于这些特点，它受到很多大豆分子育种工作者的青睐，但运用这种方法在切子叶节时需要进行精心人工操作，且不定芽常起源于多细胞，所形成的再生植株有较多的嵌合体，加大了后代的筛选难度，子叶节受体系统的转化效率较低。

（2）大豆胚尖受体系统：大豆胚尖受体系统是将发芽1天的大豆剥去种皮，将两片子叶从胚轴上剥掉，去掉真叶，再用农杆菌侵染胚尖。大豆胚尖再生系统既可以用幼胚胚尖，也可以用成熟胚的胚尖。它的特点是得到再生苗时间短，1-2个月就可以得到再生植株，且再生植株嵌合体少。基于上述特点，越来越多的研究者采用这种方法。但这种方法在农杆菌侵染阶段的技术难度较高，筛选时较困难，且得到的转化子较少。

（3）体细胞胚受体系统：这种方法是经体细胞发生形成的在形态和功能上类似于有性胚的结构，然后以其为转化受体。现在主要以未成熟胚的子叶为外植体，经过诱导后形成体细胞胚。这种受体系统的特点是：体细胞胚的形成与大豆基因型有很大关系，一旦形成体细胞胚后可以大量扩繁，受体数量多，易于转化，但起源于多细胞，增加了筛选的难度。

（4）半子叶受体系统：用子叶作为受体系统是Paz等于2005年首先提出来的，这种方法是将用水浸泡过夜的大豆种子，剥去种皮后，将胚轴部分去掉，留下子叶，然后将子叶与农杆菌共培养。这种方法避免了由于子叶节划伤时需要精心操作的人为因素影响，使操作更简单；但这种转化方法出苗困难，转化效率低。

发明内容

本发明的目的是提供一种转化大豆的方法，有效克服现有技术技术难度高、筛选难度大、嵌合体较多、转化效率偏低等技术缺陷。

为实现上述目的，本发明提供了一种转化大豆的方法，包括：

大豆种子萌发后去除子叶和第一片真叶，获得裸露的分生组织；

所述裸露的分生组织接种到含有细胞分裂素的预处理培养基上进行预处理；

农杆菌侵染所述预处理后的分生组织块。

优选地，所述细胞分裂素为1mg/L6-苄基腺嘌呤和2mg/L玉米素的任意一种或任意组合。

进一步地，所述预处理培养基还包括乙酰丁香酮。

更进一步地，所述转化大豆的方法还包括所述预处理后的分生组织块创伤后进行超声波处理2-4分钟。

在上述技术方案的基础上，所述转化大豆的方法还包括超声波处理后的分生组织块在含有选择剂的培养基上培养，所述选择剂是草丁膦。

为实现上述目的，本发明还提供了一种生产稳定转化的大豆植物的方法，包括：

大豆种子萌发后去除子叶和第一片真叶，获得裸露的分生组织；

所述裸露的分生组织接种到含有细胞分裂素的预处理培养基上进行预处理；

农杆菌侵染所述预处理后的分生组织块；

侵染后的分生组织块与所述农杆菌共培养；

在含有选择剂的培养基上培养并选择转化的抗性组织；

转化的抗性组织再生为大豆植物。

优选地，所述细胞分裂素为1mg/L6-苄基腺嘌呤和2mg/L玉米素的任意一种或任意组合。

进一步地，所述预处理培养基还包括乙酰丁香酮。

更进一步地，所述选择剂是草丁膦。