[发明专利]一种乙酰甲胺磷降解芽孢杆菌J1及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种乙酰甲胺磷降解芽孢杆菌J1及应用。 

背景技术

我国全面禁止在农业生产中使用甲胺磷、甲基对硫磷、磷胺等高毒性农药。乙酰甲胺磷由于具有高效、低毒性的特点，已作为高毒性农药的替代品被广泛应用蔬菜、果树等农作物的病虫害防治中，其产量也在逐年增加。虽然乙酰甲胺磷比甲胺磷等传统有机磷农药毒性低，但由于其广泛使用，也存在着环境污染和农药残留的问题。因此，如何降低乙酰甲胺磷的污染和残留问题已成为理论研究和技术开发的焦点。 

微生物是地球生态环境中的重要类群，由于其种类繁多、生境各异，其生理代谢特点也多种多样，土壤有机污染物主要靠微生物来降解，很多污染物的修复技术已经着眼于利用微生物类群的降解作用。利用微生物的代谢作用降解各类人工合成的农药，使其转化成无污染的无机物，是当前研究的热点，也是最有前景的应用开发领域。从环境中分离筛选高效降解乙酰甲胺磷农药的细菌，对消除农药污染、净化环境有着重大的现实意义。 

发明内容

鉴于上述和/或现有乙酰甲胺磷降解中存在的问题，提出了本发明。 

因此，本发明其中一个目的是提供一种乙酰甲胺磷降解芽孢杆菌J1。 

为解决上述技术问题，根据本发明的一个方面，本发明提供了如下技术方案：一种乙酰甲胺磷降解芽孢杆菌J1，已于2013年6月21日保存至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，所述菌株的保藏号为：CGMCC NO.7793；分类命名为芽孢杆菌Bacilus sp.，菌株的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所述。 

作为本发明所述乙酰甲胺磷降解芽孢杆菌J1的一种优选方案，其中：由下述方法制得： 

（1）从长期受乙酰甲胺磷污染的土壤中分离样品，加入100mL液体LB培养基中，以140r/min转速于30℃培养24h;所述LB液体培养基成份为：每1L蒸馏水中含有蛋白胨10g，酵母粉5g，NaCl10g； 

（2）将培养物接种到乙酰甲胺磷降解菌筛选培养基，于培养温箱中培养2d，筛选乙酰甲胺磷降解菌株，所述乙酰甲胺磷降解菌筛选培养基成份为：每 1L培养基中含有乙酰甲胺磷150mg，NaCl0.5g，KH2PO4 0.5g，Na2HPO4 1.5g，MgSO4 0.5g，NH4NO3 1g，FeCl3 0.015g，CaCl2 0.005g，琼脂粉12g，以蒸馏水补足体积至1L； 

（3）观察记录菌的生长情况，筛选获得乙酰甲胺磷降解菌株。 

作为本发明所述乙酰甲胺磷降解芽孢杆菌J1的一种优选方案，其中：所述16S rDNA序列获得方法是：使用PCR方法扩增菌株16S rDNA并分析序列；用于扩增16S rDNA的上游引物序列为：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG,下游引物序列为：GGTTACCTTGTTACGACTT。 

本发明的另一个目的是将乙酰甲胺磷降解芽孢杆菌J1应用于乙酰甲胺磷降解。 

为解决上述技术问题，根据本发明的另一个方面，本发明提供了如下技术方案：一种乙酰甲胺磷降解芽孢杆菌J1在环境中对乙酰甲胺磷降解的应用。 

本发明的有益效果是:用含有乙酰甲胺磷为唯一碳源的筛选培养基，从长期受乙酰甲胺磷污染的土壤中分离获得乙酰甲胺磷降解芽孢杆菌J1，经降解分析表明，该菌株可以在乙酰甲胺磷为唯一碳源的环境中存活，可在1200mg/L乙酰甲胺磷固体和液体培养基中生长良好，具有很高的乙酰甲胺磷降解活性的特点。该乙酰甲胺磷降解芽孢杆菌J1将在环境中乙酰甲胺磷降解、环境污染修复中具有应用潜力。 

附图说明

图1是乙酰甲胺磷降解芽孢杆菌J1的菌落照片图。 

图2是菌株J1的16S rDNA的琼脂糖凝胶电泳图（1：Marker，从上到下一次大小为2000bp,1000bp,750bp,500bp,250bp,100bp；2：16S rDNA）。 

图3菌株J1在不同浓度乙酰甲胺磷中的生长曲线图。 

具体实施方式

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。 

1、主要材料 

（1）培养基