[发明专利]高效液相色谱法分离测定硼替佐米手性异构体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体涉及抗癌药硼替佐米异构体的分离测定方法。

背景技术

硼替佐米是一种人工合成的二肽硼酸盐，属于可逆性的蛋白酶体抑制剂，可以选择性地与蛋白酶体活性位点的苏氨酸结合，抑制蛋白酶体26S亚单位的糜蛋白酶／胰蛋白酶活性。同时，他还可以提高其它抗肿瘤药物的抗肿瘤作用，与许多药物合用呈现协同或增敏作用，而不是单纯的相加作用。通过全新的机制达到抗骨髓瘤的作用。国内外临床研究表明硼替佐米单药以及同常规化疗药物组成的联合化疗方案对初始治疗，以及复发难治的MM患者均有良好疗效。它被视为治疗复发性与顽固型多发性骨髓瘤的突破性疗法，研究显示此药可减缓、逆转或停止曾接受两种以上疗法但失败的患者病情继续恶化。以硼替佐米为主的联合化疗方案已被美国国家综合癌症协作网推荐作为多发性骨髓瘤患者治疗的重要选择之一。

该化合物开发成注射剂(注射用硼替佐米)，目前已经在澳大利亚、比利时、丹麦、奥地利、芬兰等二十几个国家上市，2005年在国内上市，原研厂家为美国千年制药公司。硼替佐米化学名为[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧-3-苯基-2-[(吡嗪甲酰)氨基]丙基]氨基]丁基]-硼酸，其结构式为：

出于对药物的安全性考虑，必须严格控制硼替佐米原料药的杂质含量。由上述硼替佐米结构式可知，其含有两个手性中心，存在除硼替佐米外三个手性异构体BIO1、BIO2、BIO3，结构式如下：

在进行硼替佐米质量控制时需严格控制异构体的含量，由于异构体之间性质接近，采用现有技术对硼替佐米的高效液相色谱分析方法难以分离测定异构体的含量。文献“Development and Validation of a Stability Indicating LC Method for the Assay and Related Substances Determination of a Proteasome Inhibitor Bortezomib”中公开的液相色谱方法对硼替佐米及其9个相关杂质的分离情况，其中包含上述硼替佐米的BIO1、BIO2两个手性异构体，而BIO3未在该文献考察范围内，该方法采用RP18色谱柱，流动相A：乙腈／水(0.1％甲酸)，流动相B：甲醇／水(0.1％甲酸)，检测波长270nm，流速1.0ml／min，柱温35℃，进样量20ul，对于硼替佐米的手性异构体的分离结果是仅仅能将BIO1、BIO2的重叠峰与硼替佐米分开，BIO3峰与硼替佐米峰重叠，因此该方法未能实现硼替佐米及其余三个手性异构体的分离。

为保证硼替佐米原料药的质量和使用到临床的安全性，需要寻找一种可靠有效地分析方法分离测定硼替佐米的手性异构体。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供了一种采用高效液相色谱法对硼替佐米手性异构体的分离测定方法，能够有效分离硼替佐米及其3个手性异构体，实现硼替佐米原料药中手性杂质的质量控制。

本发明提供的一种高效液相色谱法分离测定硼替佐米异构体的方法，其特征在于，该方法采用的色谱条件为：色谱柱采用固定相硅胶表面涂敷的是直链淀粉一三(3，5一二甲苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱，流动相采用流动相A即含有0.1％三氟乙酸的正己烷溶液和流动相B即1：1的无水甲醇／异丙醇溶液的组合，流速为0.1-0.7ml／min，柱温为25-40℃。