[发明专利]一种酵母菌液体生防菌剂的配方及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生防菌剂制备技术领域，尤其涉及一种酵母菌液体生防菌剂的配方及制备方法。

背景技术

目前，炭疽病在采前和采后危害芒果，造成很大的产量和品质损失，是芒果生产上的重要病害之一，其病原菌主要为胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides(Penz)Penz.&Sacc.）。长期以来，该病害的田间防治主要依赖化学杀菌剂，随着苯并咪唑类化学药剂的长期大量使用，胶孢炭疽菌已经对该类杀菌剂产生了抗药性，使得防效下降。病原菌的潜伏侵染会造成芒果在采后流通过程中的大量损失，采后炭疽病的防治也需要化学药剂，随着人们对环境保护和食品安全越来越重视，研发更加安全、环保的芒果炭疽病采前采后防治新技术，如生物防治，显得更加迫切。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种酵母菌液体生防菌剂的配方及制备方法，旨在解决现有的芒果炭疽病防治使用化学杀菌剂提高了病菌的抗药性，不利于环境的保护和食品安全性的问题。

本发明实施例是这样实现的，一种酵母菌液体生防菌剂的配方，该酵母菌液体生防菌剂的配方包括：酵母菌、蔗糖、海藻糖、半乳糖、抗坏血酸、0.05mol/L磷酸缓冲液。

本发明实施例的另一目的在于提供一种酵母菌液体生防菌剂的制备方法，该酵母菌液体生防菌剂的制备方法包括以下步骤：

采用NYDB液体培养基，将酵母菌株4-4A活化后，取两环接种于50ml种子培养基中，28℃培养24h，取100μl种子液接入发酵培养基中，28℃下，200r/min摇床培养48h；

将培养好的酵母发酵液装入50ml离心管中，4000r/min离心15min，倒掉上清液，用无菌水清洗两次，所得的沉淀加入0.05mol/L的磷酸缓冲液制成菌悬液，使酵母的浓度为1×10⁹CFU/ml，备用；

选用蔗糖，半乳糖，海藻糖作为保护剂，用磷酸缓冲液配制溶液，其中Vc的浓度为0.01%；取溶液各21.6ml，加入10⁹CFU/ml的酵母母液2.4ml，充分混匀，分装到1.5ml的离心管中，每管1ml，将每种保护剂所分装的24管分为四组保存到-20℃，4℃，10℃，25℃中；

酵母制剂中活菌数的测定，制剂中初始的活菌数通过系列稀释涂板确定。25℃保存的制剂每10d取一管测定活菌数，－20℃，4℃，10℃每月取样测定活菌数，统计制剂中酵母的存活率。

进一步，该酵母菌液体生防菌剂的制备方法制备的酵母菌液体生防菌剂使用方法为：

采前寄主对病原菌比较敏感的抽梢期、花期和幼果期时使用生防酵母，先接种生防酵母在叶片和果实伤口处迅速消耗掉营养并占领生存空间；

从开花期开始每月喷施一次，在初花期至采收期施用4次～6次防治芒果炭疽病。

进一步，酵母菌液体生防菌剂可以与低剂量的农药配合使用。

本发明提供的酵母菌液体生防菌剂的配方及制备方法，通过酵母4-4A的富集培养，酵母4-4A液体剂型的制备，酵母制剂中活菌数的测定制备的酵母菌液体生防菌剂，从开花期开始每月喷施一次可以有效减少芒果采后炭疽病的发生率，在初花期至采收期施用4次～6次防治芒果炭疽病，发病率和严重度分别下降了64%～67%和89%～90%，另外，可以将生防酵母与低剂量的农药配合使用，提高对病害的防治效果。

附图说明

图1是本发明实施例提供的酵母菌液体生防菌剂的制备方法流程图；

图2是本发明实施例提供的海藻糖作为保护剂液体剂型中酵母的存活率示意图；

图3是本发明实施例提供的半乳糖作保护剂液体剂型中酵母的存活率示意图；

图4是本发明实施例提供的酵母在缓冲液和水中的存活率示意图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。

本发明的酵母菌液体生防菌剂的配方包括：酵母菌、蔗糖、海藻糖、半乳糖、抗坏血酸、0.05mol/L磷酸缓冲液（PBS,pH=6.5）。

如图1所示，本发明的酵母菌液体生防菌剂的制备方法包括以下步骤：