[发明专利]蛋白质层析纯化填料的清洁方法

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质层析纯化填料的清洁方法。

背景技术

层析（chromatography），也称为色谱，是分离纯化蛋白质最重要的手段。根据分离纯化原理的不同，蛋白质层析种类可以分为离子交换层析（ion exchange chromatography,IEC）、凝胶层析（gel filtration chromatography,GFC）或分子排阻层析（size exclusion chromatography,SEC）、疏水层析（hydrophobic interaction chromatography,HIC）与亲和层析（affinity chromatography,AC）等主要类别。

由于层析过程中引入的微生物、热原（内毒素）等物质会污染层析获得的蛋白质，破坏、降解蛋白质或影响蛋白质作为药物使用时的安全性；而蛋白质本身又很容易污染微生物、热原（内毒素）等物质引起层析系统的污染，进而污染后续层析处理的蛋白质，所以在每次层析填料使用后，下次层析填料使用前都优选对层析填料进行清洁处理，而在药用蛋白质的生产中在层析填料的每次使用后更是必须进行清洁处理。

蛋白质层析填料的清洁通常使用强酸（如0.1-1mol/L盐酸或醋酸）、强碱（如0.2-2mol/L氢氧化钠）、高浓度盐（如1-5mol/L NaCl）、有机溶剂（如5-50%(v/v)乙醇）等清洁剂中的一种，也可以组合使用或顺序使用它们中的几种。但一方面这种使用不一定完全清除层析填料污染的杂质，另一方面这种使用还有可能破坏层析填料，从而影响层析填料的寿命和/或结合能力。这一点对亲和层析填料的影响尤其明显，更尤其对以蛋白质为配基的亲和层析填料影响非常明显。

当亲和层析填料中的配基为蛋白质，例如抗体时，由于蛋白质遇强酸、强碱、强有机溶剂、高浓度盐时极容易变性，而亲和层析纯化的原理利用的又是亲和层析填料配基与目标蛋白质之间基于各自构型与活性的高度特异性结合，所以以蛋白质为配基的亲和层析填料不能用常规的强酸、强碱、强有机溶剂、高浓度盐处理，这也就造成了这类填料清洁处理的困难。基于这一问题，在治疗用单克隆抗体类药物的层析纯化过程中，使用了修饰蛋白A（Protein A）配基的MabSelect系列填料，其可以耐受0.1-0.5mol/L氢氧化钠短时的清洁处理。但使用该系列填料层析纯化单克隆抗体却大大增加了层析纯化的成本，且层析填料耐强碱处理的能力也只是得到了有限的提高。

发明内容

本发明的目的是提供一种蛋白质层析纯化填料的清洁方法，以在保证甚至提高清洁效果的基础上大幅度的降低清洁过程对蛋白质层析纯化填料结合能力的破坏，从而延长蛋白质层析纯化填料的使用寿命。

为实现此目的，在基础的实施方案中，本发明提供蛋白质层析纯化填料的清洁方法，其是用清洁有效量的质量体积比浓度为0.05%-5%的苯扎氯铵（苯扎氯铵也称为“洁尔灭”）水溶液清洁所述的蛋白质层析纯化填料。

本发明所述的蛋白质层析纯化填料可以是任何类型可以用于纯化蛋白质的层析填料，优选离子交换层析填料、凝胶或分子排阻层析填料、疏水层析填料和亲和层析填料，更优选亲和层析填料，并最优选以蛋白质为配基的亲和层析填料。

本发明所述的蛋白质可以是任何天然的或重组的蛋白质；可以是结构蛋白质，也可以是功能蛋白质；可以是药用的蛋白质，也可以是非药用的蛋白质，但优选药用的蛋白质。

本发明所述的蛋白质层析纯化填料的清洁方法可以是在位清洁，也可以是拆卸层析纯化填料后的离线清洁，但优选在位清洁。在位清洁时可以用质量体积比浓度为0.05%-5%的苯扎氯铵水溶液连续冲洗层析填料，冲洗体积优选3-200个柱体积；也可以在将清洁液充满所述的蛋白质层析纯化填料后，密闭装填所述的蛋白质层析纯化填料的蛋白质层析纯化柱一段时间以达到清洁作用，密闭层析柱的时间优选在0.5-10小时之间；还可以综合以上两种方法，以既可减少清洁液连续冲洗所述的蛋白质层析纯化填料的体积，也可缩短密闭层析柱后的清洁时间。

本发明清洁所述的蛋白质层析纯化填料的苯扎氯铵的浓度可以通过测试下文所述的蛋白质层析纯化填料的清洁效果，以及清洁前后蛋白质层析纯化填料的结合能力的变化确定，同时还要考虑苯扎氯铵在水中的溶解性、苯扎氯铵在清洁后是否会有残留。由此确定的苯扎氯铵的质量体积比浓度为0.05%-5%，更优选质量体积比浓度为0.1%-1%。