[发明专利]几个强抑制白粉病的新四氢呋喃化合物及应用

说明书

技术领域

本发明属于海洋微生物领域，具体的说是海洋生境链霉菌通过人工培养、发酵、提纯获得4个新化合物，还涉及到该化合物作为防治栽培植物白粉病及植物其它病害的应用。该菌种保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址为北京市朝阳区北辰西路3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期2011年2月25日，保藏编号CGMCC No.4607，分类命名Streptomyces nitrosporus。 

背景技术

近几年来，国际上对农药残留问题日益重视，禁用限用的农药越来越多、残留标准不断提高，每年因化学农药残留问题造成中国农产品出口的直接和间接损失巨大，同时随着中国经济的发展和人民生活水平的提高，农产品安全问题也受到政府和民众普遍关注，急需开发高效低毒的新农药。从天然产物中开发高效低毒的新先导化合物是创制新农药的关键。与其他生物源农药相比，微生物源农药以其开发费用低、更容易实现产业化的优势，成为国内外开发新农药的首选资源，寻找微生物源的新结构活性物质或已有化合物的新功能是生物农药创制的重要途径。 

在已有的植物病害中，白粉病是分布广、危害重、难防治的病害之一，广泛寄生于粮食、蔬菜、经济等栽培植物，每年给农业造成巨大经济损失，且抗药性发展迅速，需要不断开发新农药，而从已开发的生物资源发现新的农用微生物的机率明显减少，开发新生境的微生物资源成为解决这一问题的突破口，海洋微生物以其生境特殊，新化合物获得率高而受到重视。 

由我们经研究测试获得产生四氢呋喃类化合物适宜的培养条件，发酵物经化学常规方法提取，获得4个新四氢呋喃类化合物，这4个新四氢呋喃类化合物都对植物白粉病具有强抑制作用，同时也抑制其它植物病原真菌，其中化合物1-3是新化合物，化合物4与Marc Stadler在2001年报道的cyclo-nonactic acid的两种化合物互为C-8差向异构体，从未有人报道这4个新四氢呋喃类化合物具有农药活性。 

发明内容

本发明的目的是提供四种抑制白粉病和其它植物病原真菌的新四氢呋喃化合物，同时提供产生的海洋生境链霉菌菌株制备方法及其应用，充分利用了海洋微生物这一 特殊生境的天然资源，菌株通过人工培养发酵，化学方法提取、纯化、结构解析获得4个新四氢呋喃类化合物，无论离体还是活体都有很好的抑制植物病原真菌的作用。 

本发明的目的是由以下技术方案实现的，研制了几个强抑制白粉病的新四氢呋喃化合物并在防治植物病害中应用，所述的四氢呋喃化合物产生菌株CQT14-24为海洋生境链霉菌Streptomyces nitrosporeus，通过人工培养方法调节，得到发酵物再经常规化学方法提取，获得4个新四氢呋喃类化合物，4个新化合物均对白粉菌及多种植物病原菌具有强抑制作用，其特征包括如下步骤： 

1)以其保藏编号为：CGMCC No.4607的CQT14-24菌株，菌株经培养基优化测试，其发酵培养液的配方为：可溶性淀粉17-25g，燕麦浸汁100-150ml，蛋白胨2-5g，精氨酸1-2g，KNO₃1-3g，K₂HPO₄0.3-0.5g，MgSO₄0.5-1.0g，NaCl，10-15g，KCl0.03-0.05g，MgCl₂0.23-0.50g，FePO₄0.01-0.02g，水650-700ml，pH7.0-7.5，上述为培养液，加琼脂16-19g为固体培养基； 

2)菌株在上述固体培养基置22℃-25℃温箱培养5-6天，将固体培养基生长好的菌体刮下，接入步骤1中的培养液培养7天为种子液，再将种子液接入40-50L上述培养液中，22℃-25℃，转速150rpm，振荡培养9-10天，获得发酵物； 

3)发酵物通过XAD-16大孔树脂吸附，95％乙醇洗脱，浓缩萃取液，将获得浸膏用硅胶柱中进行色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇为洗脱剂梯度洗脱； 

4)收集10％-80％乙酸乙酯/石油醚洗脱液，经硅胶正相色谱，以洗脱液为10％-50％乙酸乙酯/石油醚洗脱分离，再以ODS反向色谱分离纯化，得到4个新四氢呋喃化合物。 

所述的4个新四氢呋喃化合物均为淡黄色油状物，其结构为butyl-homononactiat (1)，8-OAc-homonoactic acid(2)，homononactoyl-nonactic acid(3)和cyclo-nonactic acid(4)。