[发明专利]一种鉴别吉富罗非鱼性别的实时荧光PCR方法及引物组有效
| 申请号： | 201310548365.3 | 申请日： | 2013-11-07 |
| 公开（公告）号： | CN103667449A | 公开（公告）日： | 2014-03-26 |
| 发明（设计）人： | 唐永凯;李建林;李红霞;俞菊华;徐跑 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 李纪昌 |
| 地址： | 214081 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 罗非鱼 性别 实时 荧光 pcr 方法 引物 | ||
1. 一种鉴别吉富罗非鱼性别的实时荧光PCR方法，包括如下步骤：
第1步、提取吉富罗非鱼的RNA，反转录成cDNA；
第2步、以吉富罗非鱼的AMH基因的正向和反向引物、以及β-actin管家基因的正向和反向引物，对反转录的cDNA进行实时荧光PCR扩增；
第3步、通过双标准曲线法测定吉富罗非鱼的AMH基因的相对表达量，如果鱼种性腺中AMH表达量比成鱼卵巢高10倍以上，鱼种则为雄鱼，如果小于或等于10倍，鱼种则为雌鱼；
其中，
AMH基因的正向引物的序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的序列如SEQ ID NO.2所示；
β-actin基因的正向引物的序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物的序列如SEQ ID NO.4所示。
2. 根据权利要求1所述的鉴别吉富罗非鱼性别的实时荧光PCR方法，其特征在于：所述的第2步中实时荧光PCR扩增的程序是：94℃ 3min, 然后40个循环94℃ 5s，62℃ 20s，最后72℃ 3min，4℃保存。
3. 根据权利要求1所述的鉴别吉富罗非鱼性别的实时荧光PCR方法，其特征在于：所述的在第3步中，双标准曲线法的标准曲线是以反转录的cDNA为模板，进行5倍系列稀释，选取5个浓度梯度进行实时荧光PCR，以Ct值为坐标，以稀释倍数的对数为纵坐标，获得相对定量标准曲线。
4. 一种鉴别吉富罗非鱼性别的引物组，其特征在于：所述的引物组的一对正向和反向引物的序列如SEQ ID NO. 1～2所示。
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