[发明专利]神经胶质瘤相关肽和热休克蛋白形成的复合物及其应用

说明书

技术领域

    本发明属于生物技术领域，特别涉及神经胶质瘤抗原多肽与热休克蛋白gp96和HSP78的复合物以及它们的用途。

背景技术

神经胶质瘤是神经系统中最常见恶性肿瘤，占颅内肿瘤的32% ~60%，目前尚无根治方法。每年神经胶质瘤发病率为3-6人/10万人，年死亡人数达3万人，且发病率在不断上升。神经胶质瘤呈浸润性生长，手术无法完全切除，必需结合放疗、化疗等综合治疗手段才能延长病人生存期。但由于血脑屏障的存在及肿瘤的异质性和耐药性，传统的放疗、化疗及其联合均无法有效的消除或者控制肿瘤的生长及转移。

近年来研究发现从神经胶质瘤患者肿瘤组织中分离纯化的热休克蛋白gp96和HSP78分子免疫患者本人能够引发机体产生针对自身神经胶质瘤的特异性免疫排斥反应，起到推迟肿瘤复发的作用。

热休克蛋白(Heat Shock Protein，HSP)是一类高度保守，广泛存在于原核及真核生物中的蛋白质。gp96是热休克蛋白HSP90家族中的重要成员，在正常组织和肿瘤中均有广泛表达，主要定位于内质网腔(Endoplasmic Reticulum)。正常情况下gp96在细胞中呈低水平表达，但热休克、葡萄糖缺乏、细菌和病毒感染等均可诱导其表达增加。gp96作为分子伴侣，可阻止蛋白质聚集，协助蛋白质折叠、伸展、组装和转运，抑制错折叠蛋白质的分泌。gp96分子具有结合多肽的能力，能结合5-25个氨基酸的多肽序列。热休克蛋白HSP78是细胞质中HSP70家族中的成员，分子量约78kDa。HSP78分子作为分子伴侣能与细胞中各种短肽结合。

近年来的研究发现，HSP本身没有抗原性，抗原性由结合的短肽决定。HSP将结合的短肽呈递给MHC I类分子，激活特异性和记忆性T细胞，引发机体细胞免疫反应。gp96还可以活化树突细胞（DC)促进MHC I类和MHC II类分子以及共刺激因子的表达，从而提高免疫反应。因此gp96能够有效的递呈所结合的多肽，高效的激活肽特异性的CTL反应。这种gp96-多肽的复合物和HSP78-多肽复合物可用于防治自体肿瘤和某些传染性疾病。

目前已证实gp96和HSP78分子能结合多种抗原多肽，包括泡状口炎病毒抗原区肽、鼠H-2Kb限制的卵清蛋白抗原表位肽、H-2La限制的白血病表位肽、乙肝病毒抗原肽等。但目前为止未见从神经质瘤患者肿瘤组织中分离鉴定与HSP结合的抗原多肽。

神经胶质瘤作为神经系统中最常见恶性肿瘤。尽管自体gp96免疫和放化疗联合应用可将初发肿瘤患者的无进展生存期提高160%，将总体生存期由14.6个月延长至24个月。然而，所有的神经胶质瘤患者的2年无进展生存率仍不超过20%，神经胶质瘤从总体上仍然不能治愈。其主要原因是这种治疗方法对肿瘤组织大小的要求和疫苗制备的一次性。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题是筛选神经胶质瘤特异性的肽段。克服肿瘤细胞免疫编辑导致的低免疫原性，能够在健康个体及神经胶质瘤患者诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(又称杀伤性T细胞，CTL)，而且CTL具有强大的抗神经胶质瘤作用，对正常细胞及组织无破坏作用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之一是：一种表位肽，其特征在于表位肽来源于肿瘤抗原SURVIVIN。所述的表位肽是从SURVIVIN-2B的第87位氨基酸开始，肽段由9个氨基酸序列构成，所述的表位肽的氨基酸为TLGGRGGRI，如序列表中SEQ ID NO.1所示。

本发明中，所述的表位肽可与热休克蛋白gp96或HSP78形成复合物。

本发明的复合物既包括热休克蛋白以非共价键与多肽结合，又包括热休克蛋白以共价键与多肽结合。本发明提供了制备本发明的如上所述抗原多肽与热休克蛋白gp96和HSP78的复合物的方法。

本发明所诉的表位肽可以单独或以热休克蛋白复合物形式在HLA-A2转基因小鼠中诱导形成特异性的CTL。

本发明所述形成的特异性CTL可以在转输实验中显著的抑制HLA-A2阳性的神经胶质瘤细胞U251的生长。

本发明所诉的表位肽可以在体外单独或以热休克蛋白复合物形式刺激HLA-A2阳性神经胶质瘤患者PBMC分泌IFN-g，且这种作用在自体gp96复合物免疫后显著增强。

本发明所诉的表位肽可以单独或以热休克蛋白复合物形式提高HLA-A2阳性神经胶质瘤患者特异性T细胞反应。

本发明所述的特异性CTL的诱导可以被Treg细胞的抑制剂增强。