[发明专利]利用幼胚拯救技术获得小报春与岩生报春种间杂种的方法

权利要求书

1.利用幼胚拯救技术获得小报春与岩生报春种间杂种的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）小报春与岩生报春杂交：利用岩生报春新鲜花粉，以小报春为母本进行人工去雄并套袋隔离，重复授粉2-3次，将授粉后的小报春置于温室内培养；

2）幼胚拯救及杂交后代的获得：取杂交授粉后25-30d的小报春子房，以75%酒精进行表面消毒后，置于含吐温20的次氯酸钠溶液中灭菌，然后用无菌水冲洗，沥干或吸干表面水分，切开子房取出未成熟的种子接种至培养基I中，于20-25℃，每日光照10-12h，光照度1600-2000lx的条件下进行培养；25-30d后，将得到的幼苗转接至培养基II中壮苗，于20-25℃，每日光照10-12h，光照度1600-2000lx的条件下进行培养；25-30d后，将得到的幼苗转接至培养基III中，于20-25℃，每日光照10-12h，光照度1600-2000lx的条件下进行扩繁，即获得小报春与岩生报春杂交后代；

3）种间杂种鉴定：对获得的杂交后代进行杂种形态学鉴定，最终获得小报春与岩生报春种间杂种；

其中，培养基I为：1/2MS+50g/l蔗糖+0.1mg/l NAA+0.1mg/l6-BA+6g/l琼脂；培养基II为：1/2MS+30g/l蔗糖+6g/l琼脂；培养基III为：1/2MS+30g/l蔗糖+0.1mg/l NAA+2.0mg/l6-BA+6g/l琼脂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1）中重复授粉3次。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）中用75%酒精消毒30s。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2）中所述含吐温20的次氯酸钠溶液中有效氯含量为2%，吐温20含量为1-1.5mL/L。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，用含吐温20的次氯酸钠溶液灭菌15min，然后用无菌水冲洗5次。