[发明专利]一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种无血清培养基，具体涉及一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基。

背景技术

MDCK细胞(Madin-Darby canine kidney cells，MDCK)由Madin和Darby于1958年从美国Cocker Spaniel母曲架犬的肾脏组织分离培养的。MDCK细胞目前广泛运用于多种病毒的扩增和纯化，如呼肠孤病毒、腺病毒、犬细小病毒、猫粒细胞缺少症病毒及禽流感病毒等，由于其病毒感染效率高、增殖快，且不易变异，MDCK细胞系被公认为是最适于甲、乙型流感病毒疫苗生产的3种细胞系之一。

我国目前流感疫苗（包括人用流感疫苗、动物流感疫苗）均采用鸡胚法生产，该工艺存在周期长、操作繁琐、工作量大以及很容易产品和环境污染等缺陷。随着生物制品质量安全性标准的提高和动物细胞生物反应器高密度培养技术的推广应用，研究和生产MDCK细胞培养的流感疫苗具有广泛的应用前景。生物反应器高密度培养工艺中细胞全悬浮培养比细胞载体培养更具优势，主要表现在全悬浮培养可用无血清培养基，降低了生产成本，提高了下游产品的生物安全性；第二全悬浮培养规模可线性放大，国际上细胞生物反应器全悬浮培养的规模可达20000L/罐，国内已生产和运用的细胞生物反应器全悬浮培养的规模可达3000L/罐，但是细胞生物反应器载体培养的规模国内外最大的也超不过200L。目前国内还没有商品化的MDCK细胞无血清培养基。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种低成本、成分明确的适用于MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：一种MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基，所述MDCK细胞全悬浮培养的无血清培养基中，各原料物质的终浓度为：

氨基酸部分：

L-丙氨酸              100-120 mg/L，

L-精氨酸盐酸盐        120-200 mg/L，

L-天冬酰胺            5-10 mg/L，

L-天冬氨酸            65-80 mg/L，

L-半胱氨酸一水合物    10-45 mg/L，

L-胱氨酸盐酸盐        25-50 mg/L，

L-谷氨酸              45-72 mg/L，

L-谷氨酰胺            300-405 mg/L，

甘氨酸                70-85 mg/L，

L-组氨酸盐酸盐        110-155 mg/L，

L-异亮氨酸            142-180 mg/L，

L-亮氨酸              150-180 mg/L，

L-赖氨酸盐酸盐        150-250 mg/L，

L-蛋氨酸              45-80 mg/L，

L-苯丙氨酸            130-155 mg/L，

L-脯氨酸              30-72 mg/L，

L-丝氨酸              55-80 mg/L，

L-苏氨酸              150-200 mg/L，

L-色氨酸              190-250 mg/L，

L-酪氨酸二钠盐        50-90 mg/L，

L-缬氨酸              150-200 mg/L，

维生素部分：

生物素                0.001-0.005 mg/L，（国药试剂，67000260），

氯化胆碱              5-15 mg/L，

D-泛酸钙              2-5 mg/L，

叶酸                  2-5 mg/L，

烟酰胺                2-5 mg/L，

盐酸吡哆醇            2-5 mg/L，

核黄素                0.1-0.5 mg/L，

盐酸硫胺素            0.1-0.5 mg/L，

肌醇                  5-20 mg/L，

B12维生素             0.5-1.0 mg/L，